三七总皂苷对肺纤维化大鼠的smad 2-3表达的影响

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1、三七总皂苷对肺纤维化大鼠的Smad2/3表达的影响摘要：目的：观察三七总皂苷对肺纤维化大鼠smad2/3表达的影响，探讨其作用机制。方法：56只SD大鼠随机分为模型组、对照组、三七总皂苷组、地塞米松组。采用博莱霉素制备肺纤维化大鼠模型，24h后给予干预药物，分别于14d、28d处死动物后观察其病理变化、肺系数及Smad2/3的表达。结果：与模型组比较，三七总皂苷组的肺泡炎和肺纤维化明显减轻，肺组织Smad2/3表达降低。结论：三七总皂苷抑制博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化的机制与其抑制Smad2/3蛋白有关。　　关键词：三七总皂苷；Smad2/3蛋白

2、；博莱霉素；肺纤维化　　：R285.5：A　　：1007-2349（2011）05-0065-02　　　　肺纤维化（Pulmonaryfibrosis，PF）疾病是各种不同病因肺部疾病的共同结局，包括特发性肺纤维化、结节病、尘肺、过敏性肺炎、药物和放射线导致的纤维化，与胶原血管病有关的致纤维化肺泡炎等，病因各异，疾病谱广泛。目前有研究显示三七总皂苷对肝纤维化有一定干预作用［1］。本研究采用博莱霉素制备肺纤维化大鼠模型，以Smad2/3为靶点，观察其肺纤维化组织中的表达，有助于揭示肺纤维化的发病机制以及指导临床防治。　　1材料与方法　　1.1动物

3、健康雄性SD大鼠56只，体重200±20g，购于昆明医学院实验动物中心，合格证号：0010295。　　1.2药物与试剂博莱霉素：15mg/支，日本化药株式会社生产；三七总皂苷（络泰注射用血塞通）由昆明制药集团有限公司提供；Smad2/3试剂盒购自武汉博士德生物有限公司；DAB显色试剂盒由福州迈新生物技术开发有限公司提供。　　1.3动物模型的建立及分组将大鼠随机分为模型组（MG）、对照组（CG）、三七总皂苷组（PG）、地塞米松组（DG），每组14只。除对照组外，其他3组大鼠均按照文献报道的方法，经气管一次性注入博莱霉素A5（5mg/kg体重）复制

4、肺纤维化大鼠模型。对照组以生理盐水代替博莱霉素。术后置动物于干燥、温暖条件下喂养，定期消毒喂养场所。模型建立24h后腹腔内注射干预药物，每日1次，PG为三七总皂苷100mg/kg•d，DG为地塞米松1mg/kg•d，MG则为0.9%氯化钠注射液0.4mL/d。　　1.4标本的采集各组大鼠分别于手术后第14d和28d各处死7只。大鼠称重后麻醉，剖胸取肺并称重，取左下肺叶固定于10%的福尔马林溶液中，供HE染色和免疫组化检测用。　　1.5检测指标（1）一般情况观察。（2）病理组织学检查：HE染色。（3）smad2/3蛋白测定

5、：普通光镜下观察，每张切片随机选取5个低倍视野，胞浆呈清晰棕色为阳性。按染色结果分为：0级阴性（-），1级灶状阳性（+），2级弥漫性弱阳性（++），3级弥漫性中等阳性（+++），4级弥漫性强阳性（++++）。　　1.6统计学方法数据以均数±标准差表示，采用SPSS11.0统计软件包进行分析，采用t检验，P<0.05为有显著性差异。　　2结果　　2.1一般状况观察大鼠在术后第1d，精神萎靡，活动减少，饮食差，第2d恢复。CG、PG精神、饮食好，毛色润泽，反应灵敏，体重进行性增加，无死亡。DG造模7d后死亡3只，均于夜间死亡，死亡原因为互相嘶

6、咬，7d后大鼠精神、饮食、活动明显较以上2组差，体重呈下降趋势。MG14d后一般情况变差，体重无明显增长，其间死亡1只。　　2.2病理学观察MG第14d肺泡炎症，成纤维细胞增生，有胶原沉积及斑片状的纤维化改变；第28d炎症细胞减少，病变范围弥散，大量肺泡结构萎陷、破坏，大量胶原沉积在新生的毛细血管周围，肺泡间隔以及部分肺泡腔被胶原和纤维蛋白占据（见图1）。PG、DG14d肺泡炎症较好转，少量淋巴细胞浸润，成纤维细胞少量增生；第28d肺泡炎症消退，少量肺泡结构萎陷，肺泡间隔少量胶原沉积（见图2）。　　2.3smad2/3蛋白测定CG大鼠肺组织仅见

7、smad2/3少量表达。MG可见smad2/3广泛表达于肺组织细胞胞浆和胞核（见图3）。14d和28d均强阳性表达，有显著性差异（P<0.05）。PG、DGsmad2/3蛋白表达趋势同MG（见图4），但低于MG，高于CG，差异有显著性意义（P<0.05）（见表1）。　　注：与CG比较，*P<0.05；与MG比较，#P<0.05　　3讨论　　PF的发病机制极为复杂，细胞因子在其发生发展过程中起着重要作用，它们构成一个复杂的细胞外信号传导分子的X络系统和链式反应系统，导致以炎细胞浸润、纤维母细胞增生和间质结缔组织沉积为特

8、征的免疫介导的慢性炎症［2］。Smad家族蛋白是细胞因子受体的胞内激酶底物，介导了TGF-β1对基因表达的调控［3］。三七总皂苷具有抗脂质过氧化作用，