猪食管肌间神经节内pacap免疫阳性神经末梢来源

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1、猪食管肌间神经节内PACAP免疫阳性神经末梢来源【摘要】目的探讨猪食管肌间神经节内垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP）免疫阳性神经末梢的。方法采用荧光免疫组织化学技术及逆向神经元示踪技术。结果猪食管肌间神经节内含有叶片状、PACAP免疫阳性的神经纤维网；经食管下括约肌腹侧壁行荧光素快蓝（FB）神经元逆向示踪研究显示，节神经节（NG）内含有许多FB示踪神经元，其中约有48％呈PACAP免疫阳性。结论猪食管肌间神经节内的PACAP免疫阳性神经末梢网很可能于迷走神经，为猪食管壁内的肌间神经节内板层样神经末梢。NG神经元顺向示踪研究结合免疫组织化学技术，将有助于确定此结构的形态特点并揭

2、示其神经化学特征。【关键词】食管神经节神经末梢免疫组织化学猪　　［ABSTRACT］ObjectiveTostudytheoriginofPACAPimmunoreactivenervefibersinmyentericgangliaofporcineesophagus.MethodsImmunohistochemistrybinedmunoreactivenervefibersyentericgangliaofporcineesophagus,especiallyintheregionofabdominalanyfastbluetracedneuronsongmunore

3、active.ConclusionThedensePACAPimmunoreactivenervefibersfoundinthemyentericgangliaofporcineesophagusinaendingsofvagalorigin.［KEYO,USA）15～20μL分别注射于食管LES腹侧壁不同部位内（每次1～2μL）。术后1周，动物经麻醉,40g/L多聚甲醛灌流固定后，取两侧NG制成冷冻切片(16μm厚)，荧光显微镜下查找切片中FB示踪神经元，然后结合荧光免疫组织化学染色方法，确定FB示踪神经元神经化学特性。荧光免疫组织化学方法一抗采用nNOS(Mouse,1

4、∶1000,Sigma)、血管活性肠肽（VIP，Mouse,1∶1000,EastAcres)、PACAP（Rabbit,1∶500,Peninsula)，分别对食管LES切片及含有FB示踪神经元的NG切片进行不同组合的双重染色，二抗采用GoatantimouseFITC(1∶400,Jackson)、GoatantirabbitCY3(1∶5000,Jackson)。对照采用去除一抗或用正常羊血清替代一抗的方法。标本在荧光显微镜（OlympusBX50）下观察，图像通过AdobePhotoshop5.5softs,SanJose,USA)进行处理。　　2结果经食管下

5、括约肌腹侧壁行FB逆向神经元示踪研究显示，在NG切片中共观察到79个FB示踪神经元。将含有FB示踪神经元的NG切片进行荧光免疫组织化学双重染色，发现其中38个神经元（约48％）呈PACAP免疫阳性，而且部分神经元胞体同时含有神经元性一氧化氮合成酶(nNOS)免疫阳性物（图1）。　　3讨论以往对大鼠与小鼠经NG进行顺向神经元示踪发现,迷走传入神经末梢IGLEs多聚集在上消化道，呈覆盖在肌间神经节表面板层样、叶片状分布的神经末梢网。本研究小组在研究猪食管的神经支配时观察到，正常猪食管壁肌间神经节表面也含有叶片板层样神经末梢网结构，此结构呈PACAP及VIP免疫阳性[4]，而啮齿类动

6、物大鼠的相应结构却呈谷氨酸免疫阳性，可见种属之间IGLEs结构的神经化学方面存在明显的差异。经左侧NG远侧端迷走神经干切断术后，发现猪食管LES腹侧壁PACAP免疫阳性神经末梢网明显减少[4]。本实验经LES腹侧壁行FB逆向神经元示踪还显示，NG切片中观察到约79个FB示踪神经元,其中38个呈PACAP免疫阳性（约占48％），部分神经元同时含有nNOS免疫阳性物。综合上述结果可以初步推断：见于猪食管肌间神经节内的PACAP免疫阳性神经末梢网很可能于迷走神经，为猪食管壁内的IGLEs。为进一步确定此结构，下一步需要作NG顺向神经元示踪的研究。已有文献报道，种属之间在IGLEs神经

7、化学特征方面存在着明显的差异。如钙离子结合蛋白Calbindin可以特异性免疫标记大鼠食管内IGLEs，但不能标记小鼠食管内IGLEs[6]。因此，在确定了猪食管壁内的IGLEs形态、结构特点的同时，有必要进一步揭示其神经化学特征。目前，有关IGLEs神经化学特征方面的资料，主要于对大鼠及小鼠的研究。大鼠食管内IGLEs含有P物质(SP),大鼠及小鼠食管内IGLEs还含有谷氨酸囊泡转运蛋白（VGLUT2）免疫阳性反应物[1,2]，说明大鼠及小鼠食管内IGLEs可能通过释放SP或谷氨酸，影响肌