组蛋白去乙酰化酶抑制通过c

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1、组蛋白去乙酰化酶抑制通过c前言一、Bmi-1在LEPCs细胞中分化中的研究肝脏是动物体内重要的消化器官，参与体内蛋白质、碳水化合物、脂类等生物大分子的代谢。肝癌在世界范围内是第五大常见癌症，在肿瘤相关的死亡中处于第三位[1]。肝癌具有高发病率和高致死率等特点。HCC每年在全球范围内影响100万人左右，发病率几乎等同与死亡率。原发性肝癌中常见的两种类型是肝细胞癌（Hepatocellularcarcinoma，HCC)和胆管细胞癌（cholangiocarcinoma,CC)，分别从肝细胞和胆管细胞转化而来的。然而，有一些原发性肝癌却是HCC和CC的中间状态或者是混合而成。这些

2、肿瘤可能起源于转化的肝前体细胞或者是卵原细胞。在前期研究中，本实验室建立了来自小鼠成体肝脏的肝原始细胞（liverepithelialprogenitorcells，LEPCs）。LEPCs细胞于倒千里光碱损伤的小鼠肝脏。倒千里光碱可抑制成熟肝细胞的增殖能力，在2/3肝切除诱导的肝再生过程中，受倒千里光碱损伤的成熟肝细胞发生凋亡并被选择性移除，与此同时，肝实质中会产生一种集落样增殖的肝原始细胞，并通过这种细胞的增殖和分化来实现肝脏的再生。LEPCs移植入裸鼠不具有成瘤性，LEPCs为研究肝脏发育、肝脏损伤后的修复、肝脏肿瘤发生以及肝脏疾病的细胞治疗的重大生物学和医学问题提供了

3、理想的细胞模型和材料[2]。我们在前期工作中发现LEPCs在（HistoneDeacetylaseInhibitors,HDACi）小分子（SodiumButyrate，NaB）诱导7天之后向成熟肝细胞分化，并发现NaB可显著下调干性基因（Blymphomamurineleukemiavirusinsertionregion1homolog，Bmi-1）的表达[3]。二、组蛋白去乙酰化酶与组蛋白去乙酰化酶抑制剂组蛋白的乙酰化和去乙酰化在真核细胞的转录调节水平发挥了重要作用[12]。组蛋白和非组蛋白的乙酰化状态由组蛋白乙酰化酶（histonedeacetylases,HDACs

4、）和组蛋白去乙酰化酶（histoneacetyl-transferases,HATs）共同来决定。HATs使得组蛋白的赖氨酸残基乙酰化，而HDACs使得去除乙酰化。通常来说，组蛋白的乙酰化使得染色质的结构更加疏松，促进转录激活。由于HDACs对组蛋白的去乙酰化作用，可以促进染色质凝聚，从而抑制转录[13]。HDACi可以通过染色质重排和改变转录因子复合体的蛋白结构来选择性的改变基因转录。此外，HDACs还有许多调节细胞增殖和细胞死亡的非组蛋白底物，如激素受体，分子伴侣蛋白和细胞骨架蛋白等。因此，HDACi诱导的细胞凋亡可能涉及依赖转录和不依赖转录的机制[14-17]。基于酵母

5、和人类中的HDACs的同源性，可以将人类的18种HDAC分为四大类（图1）[18-20]。人类HDACs的第一大类与酵母的RPD3（去乙酰化酶）在催化位点上具有高度的同源性，包括HDAC1，HDAC2，HDAC3和HDAC8。最近的系统发育分析显示HDACI可以划分为Ia（HDAC1和HDAC2），Ib(HDAC3)和Ic(HDAC8)。HDACs的第二大类与酵母的HDa1（组蛋白去乙酰化酶1）具有同源性，包括HDAC4，HDAC5，HDAC6，HDAC7，HDAC9和HDAC10。第二大类可以分为IIa（包括HDAC4，HDAC5和HDAC10）和IIb类（HDAC6和HD

6、AC10），具有两个催化位点[21]。所有HDAC第一大类和HDAC的第二大类是锌依赖性激酶。HDACs的第三大类包括sirtuins需要NAD+酶的活性。在这些SIRT中，SIRT1与酵母沉默信息调节因子是同源类似物。HDACs的第三大类的酶活性不受TSA曲古霉素的抑制，而TSA是可以抑制HDACs的第一大类和第二大类的。HDAC的第四大类的代表是HDAC11与酵母的HDa1相似物3相似，与HDAC第一大类和第二大类在核心催化区域有着保守的残基序列[21]。..实验材料一、主要器材和设备CO2恒温培养箱：Heraeus5060EK；超净工作台：苏州净化设备有限公司；高速离心

7、机：ThermoscientificInc；台式低温高速离心机：HitachiHIMACCR21；荧光显微镜及摄影装置：NikonECLIPSETE2000-U；倒置相差显微镜：NikonTM显微镜和HFX-DX显微摄影系统；光学显微镜：MOTICSFC-28SERIES；紫外分光光度计：Biophotometerplus，德国Eppendorf公司；凝胶成像分析仪：上海复日科技有限公司；流式细胞仪：德国MACSQuantTM公司；酶标仪：TECANinfiniteF50；恒温水浴箱：Memert公司；