亚砷酸对人肺腺癌细胞的体外抑制作用及机制研究论文

《亚砷酸对人肺腺癌细胞的体外抑制作用及机制研究论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、亚砷酸对人肺腺癌细胞的体外抑制作用及机制研究论文.freelg／Ｌ)，并设模型对照组；采用倒置相差显微镜观察细胞形态.freelanlungadenocarcinomacells(LAC)atlogarithmicgrog/Lrespectively.MeanodelcontrolgrouporphologicalfeaturesofLACindifferentgroupsicroscope，groinedbymethylthiazolyltetrazolium(MTT)assay，andtheexpressionofp53

2、geneelinkedimmunosorbentassay(ELISA)method.【Results】AS2O3indifferentdosagesobviouslyinhibitedtheproliferationofLACinatimeeffectmanner，andmarkedlyincreasedtheexpressionofp53gene（Ｐ＜００５orＰ＜００１paredodelgroup）.【Conclusion】Thetherapeuticmechanismofarsenolitumfortumor

3、maybeassociatedacology；ARSENICTRIOXIDE/pharmacology；LUNGNEOPLASMS/TCDtherapy；CELLAPOPTOSIS；CELLCULTURE；GENEEXPRESSIONREGULATION中药砒霜（三氧化二砷，AS２Ｏ３）及砷制剂对肿瘤的治疗是近年来的研究热点，特别是对白血病的治疗已为人们所关注。砷作为抗肿瘤药物在我国已有百年历史，中药传统方剂青黄散、十味丸等治疗不同类型的白血病确有一定疗效，经鉴定其中有效成分为含砷中药。近年来的实验与临床研究发现，三氧化二砷

4、对肺癌有良好的抗肿瘤作用，其作用机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡、抑制其增殖、逆转耐药等有关［1-5］，但其治疗肺癌的确切机理未完全阐明。近年来临床上将亚砷酸（化学成分：三氧化二砷）用于治疗肺癌已取得一定的效果，故本研究试图通过体外培养人肺腺癌细胞株（LAC）作为研究对象，观察亚砷酸对LAC细胞形态及p53基因表达的影响，以了解亚砷酸用于治疗肿瘤的机理。１材料和方法11细胞株、药物与试剂LAC细胞株由广州军区总医院分子肿瘤学研究所细胞室提供；亚砷酸注射液，批号：19990191，由哈尔滨伊达药业有限公司生产；胎牛血清（FSC）为

5、中国医学科学院血液学研究所产品；RPMI1640培养基、乙二胺四乙酸（EDTA）、胰蛋白酶、二甲基亚砜（DMSO）、四甲基偶氮唑盐（MTT）均为GIBCO公司产品；人p53定量酶联免疫吸附法（ELISA）试剂盒购自上海森雄科技实业有限公司。12细胞培养将冻存的LAC株按常规方法复苏，接种于RPMI1640培养液（含体积分数为10％FSC、100?U/mL青霉素、100?mg/mL链霉素）中，于37℃、体积分数为5%CO2浓度及饱和湿度的恒温培养箱中培养，细胞呈单层贴壁生长，每?2～３?d?传代1次；传代时用?025?

6、g／Ｌ?的胰蛋白酶和?02?g／ＬＥＤＴＡ?消化?2～３?min，以培养液吹打制成细胞悬液，接种至?50?mL?培养瓶，至细胞生长旺盛后，取对数生长期细胞用于实验。13细胞形态观察选用对数生长期细胞，用胰蛋白酶消化后，采用培养细胞计数法，用1640液稀释成2×105?/mL浓度的细胞悬液接种至50?mL培养瓶；置于37℃、体积分数为5％CO2及饱和温度的恒温培养箱中培养?24?h?后，实验组分别加入各种浓度（075、10、15、20?mg/L）的亚砷酸，模型组则加入不含药的细胞培养液。置于CO2培养箱中培养?48

7、?h?、?72?h?后，将培养瓶置于倒置相差显微镜下进行细胞生长状态的观察。14MTT比色法检测LAC肿瘤细胞的生长抑制率选用对数生长期细胞，用胰蛋白酶消化后，采用培养细胞计数法，用RPMI1640培养液稀释配成1×105个/mL的细胞悬液，接种于96孔培养板中，每孔接种100?μL，在ＣＯ２培养箱中培养?24?h?后，实验组加入不同浓度的亚砷酸（075、10、15、20?mg/L）100?μL，模型对照组则换含等体积溶剂的培养基，每组设16孔；每日更换新鲜培养液，以维持亚砷酸药液浓度不变；在ＣＯ２培养箱中培养?

8、24、48、72?h?后每孔加入20?μLMTT无血清培养基，37℃继续培养?4?h?后，每孔加入100?μLDMSO，振荡混匀后，在酶标仪上检测492?nm处各孔吸光度（Ｄ）值，计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率：p抑制／%＝（1－Ｄ实验组／Ｄ模型组）×100％。15人p53基因的检测选用