高效毛细管电泳法分析d苯丙氨酸与dn乙酰苯丙氨酸的对映体杂质含量论文

《高效毛细管电泳法分析d苯丙氨酸与dn乙酰苯丙氨酸的对映体杂质含量论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、高效毛细管电泳法分析D苯丙氨酸与DN乙酰苯丙氨酸的对映体杂质含量论文【摘要】目的：建立高效毛细管电泳法(HPCE)测定不对称合成D苯丙氨酸和DN乙酰苯丙氨酸对映体杂质含量的新方法.方法：采用HPCE法对苯丙氨酸和N乙酰苯丙氨酸对映体的分离条件进行优化，并将该HPCE方法用于样品测定.结果：在40mmol/LTrisH3PO4(pH=2.5)，60g/LSβCD，-15kV分离电压，20℃柱温的优化条件下，苯丙氨酸和N乙酰苯丙氨酸对映体得到基线分离.在药物浓度为0.01~0.20g/L的考察范围内，浓度和峰面积呈良好线性，L苯丙氨酸和LN乙酰苯丙氨酸的回归方程分别

2、为：Y=1065.42X+31.02（R2=0.9989）和Y=996.02X+34.44（R2=0.9984）.freelan，USA），配有二极管阵列检测器，BeckmanSystemGold软件；320SpH计（MettlerToledoCo.）；旋光仪（PerkinElmer343,USA）.自制磺化β环糊精（sulfatedβcyclodextrin，SβCD）由陕西师范大学化学系李保林教授惠赠；其它试剂均为分析纯.对照品：光学纯的D苯丙氨酸、外消旋苯丙氨酸（上海化学试剂二厂）；光学纯的DN乙酰苯丙氨酸、外消旋N乙酰苯丙氨酸由本实验室合成（99.8%HPLC）.

3、1.2方法1.2.1对照品和样品溶液的制备L苯丙氨酸对照品溶液：精密配制1g/L的D苯丙氨酸对照品溶液.精密配置0.8g/L的外消旋苯丙氨酸溶液（含L苯丙氨酸0.4g/L）.从中分别准确吸取0.125,0.25,0.5,1.0,2.0,4.0,5.0,6.0mL置于10mL容量瓶中，分别加入上述2.0mLD苯丙氨酸对照品溶液，用水定容，则得在大量D苯丙氨酸存在下的含L苯丙氨酸0.005~0.24g/L的一系列对照品溶液；L苯丙氨酸样品溶液：精密称取不同光学纯度的D苯丙氨酸、DN乙酰苯丙氨酸分别配置成10.0g/L的样品母液，测定时根据标准曲线线性范围适当稀释.LN乙酰

4、苯丙氨酸溶液的配制同L苯丙氨酸.1.2.2电泳条件和实验方法未涂层石英毛细管柱（48.7cm×75μm,id，有效长度38.5cm，Beckman公司）.TrisH3PO4缓冲溶液中加入适量的SβCD作为背景电解质；工作电压-5~-25kV，柱温15℃~20℃；0.5psi压力进样5s；二极管阵列检测；所用溶液均经0.45μm纤维素酯膜过滤.统计学处理：采用线性回归模型对浓度与峰面积进行线性关系分析.2结果2.1手性选择剂浓度的选择考察在30~80g/L浓度范围的SβCD对苯丙氨酸和N乙酰苯丙氨酸对映体分离的影响，结果60g/L为SβCD的理想浓度（图1）.2.2背景缓冲

5、液浓度与pH值对分离效果的影响40mmol/LTris浓度为同时适合于苯丙氨酸和N乙酰苯丙氨酸两对对映体的理想分离条件(图2).通过对pH1.5~4.0范围内苯丙氨酸和N乙酰苯丙氨酸对映体分离度的考察表明，苯丙氨酸对映体在pH2.0~3.0的范围内都有良好分离，而只有在pH2.5时才可使N乙酰苯丙氨酸对映体达到基线分离，所以选择pH2.5为分离酸度.2.3毛细管温度对分离的影响在15℃~30℃的范围内，温度升高一方面使迁移时间缩短，但同时也降低了对映体的分离度.综合考虑分离度与分析时间，本实验选用20℃作为分离温度，在此温度下，两对映体均可得到较好的分离结果与相对短的迁移时间.2.4

6、样品对映体杂质含量的测定①线性关系考察:在0.01~0.20g/L的浓度范围内，按优化的电泳条件分别对L苯丙氨酸或LN乙酰苯丙氨酸进行线性关系分析，L苯丙氨酸的回归方程为：Y=1065.42X+31.02（R2=0.9989）；LN乙酰苯丙氨酸的回归方程为：Y=996.02X+34.44（R2=0.9984），其中，Y为校正峰面积（A/t），X为浓度（g/L）.②回收率与最低检测限考察:精密量取L苯丙氨酸或LN乙酰苯丙氨酸0.05,0.10,0.15g/L的对照品溶液各4.0mL（n=5），按上述电泳条件分析并计算回收率（%）.结果L苯丙氨酸的回收率在99.1％~102

7、.5％(n=5)；LN乙酰苯丙氨酸的回收率在98.1％~102.9％.同时，按上述电泳条件电泳，以信噪比S/N=3测定L苯丙氨酸和LN乙酰苯丙氨酸的最低检测限（LOD），得到L苯丙氨酸的LOD为2.5μg/mL,LN乙酰苯丙氨酸的LOD为3.0μg/mL.③样品测定:对一系列具有不同比旋光度的D苯丙氨酸与DN乙酰苯丙氨酸合成样品进行了对映体杂质含量的测定，结果杂质L苯丙氨酸的含量在0.25%~9.