葎草抗结核分枝杆菌研究论文

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1、葎草抗结核分枝杆菌研究论文.freelHumulusscandensａｇａｉｎｓｔｔｕｂｅｒｃｕｌｏｕｓｂａｃｉｌｌｕｓａｎｄｔｏｆｉｎｄｏｕｔｔｈｅａｃｔｉｖｅｆｒａｃｔｉｏｎ．MethodsＴｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｓｉｓｉｎｖｉｔｒｏｗａｓｕｓｅｄｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅiｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｓａｇａｉｎｓｔtｕｂｅｒｃｕｌｏｕｓbａｃｉｌｌｕｓｏｆｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｓｆｒｏｍHumulusscandens．ＭＩＣｏｆｔｈｅextractsｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｂｙｔｈｅｍｅａｎｓｏｆdoubleｄｉｌｕｔｉ

2、ｏｎ．ResultsTｈｅＮ－ｂｕｔａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｈａｄｏｂｖｉｏｕｓａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｔｏＨ３７ＲＶａｎｄｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｅｓｔｒａｉｎｗｈｉｃｈｓｅｐａｒａｔｅｄｆｒｏｍｃｌｉｎｉｃ．ＭＩＣｏｆｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｗａｓ１２５μｇ·ｍｌ－１ａｎｄｔｈｅｈｉｇｈｌｅｖｅｌｓ（１ｍｇ·ｍｌ－１）ｏｆｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｈａｄａｋｉｌｌｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｙ．ConclusionTheｅｘｔｒａｃｔｓｏｆH．scandensｈａveｏｂｖｉｏｕｓａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｖｉｔｒｏ．Ｉｔｉｓu

3、lusscandens（Ｌｏｕｒ．）Ｍｅｒｒ．；Ｔｕｂｅｒｃulousｂａｃｉｌｌｕｓ；Ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｓｉｓ近年来，全球结核病疫情再度上升，受到了世界各国的关注。全球１／３人口（约２０亿）感染过结核菌.freelulusscandens（Ｌｏｕｒ．）Ｍｅｒｒ．的全草。含青兰苷、天门冬素、挥发油、鞣质及树脂、木犀草素葡萄糖苷、大波斯菊苷、牡荆素等黄酮类成分，具清热解毒、利尿消肿等功效，民间用于肺结核潮热、胃肠炎、痢疾、淋证、痔疮等证［１］。早期曾有关于葎草用于治疗结核病的报道［１］。为探索抗结核中药，我们对葎草中的成分进行了初步的分离，并进行

4、了葎草提取物对结核分枝杆菌的体外抑菌活性研究。现报道如下。1材料与方法1.1材料葎草采自嘉兴郊区，由嘉兴学院生药、天然药物化学教研室陈伟光副教授鉴定。采回后切成长２ｃｍ的小段，在阴凉处用风扇吹干备用。1.2菌株结核菌标准株Ｈ３７ＲＶ，由杭州市预防保健门诊部检验科提供（购自北京疾控中心）。临床分离结核菌株由嘉兴市第一医院提供。1.3药液的制备取葎草段（２ｃｍ长）５００ｇ，７５％乙醇回流提取，提取液回收溶剂至无醇味，加适量蒸馏水溶解，分别依次用石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇萃取，上述各萃取部位回收溶剂后得各提取物。将各提取物定量溶于２５０ｍｌ容量瓶中，

5、加５０％乙醇至刻度，超声助溶，制成每毫升含相当于２ｇ生药的供试药液。剩余的水溶液挥去正丁醇，调节至同样浓度，置冰箱中备用（６℃）。1.4含药培养基的制备按常规方法配制罗氏培养基，取上述各种葎草提取液１份，加入培养基５份混匀，即成１∶５稀释度的含药培养基，分装中号试管，每管６ｍｌ。每种药液做３个复管，灭菌后备用。空白管加１ｍｌ５０％乙醇代替葎草提取液。1.5操作步骤分别取培养３周的结核菌标准株Ｈ３７ＲＶ和临床分离菌株斜面生长物适量，用比浊法稀释成１０６个／ｍｌ菌浓度，用吸管反复吸打均匀［２］。在每支含药和空白对照培养液管中分别加入０．１ｍｌ上述Ｈ３７

6、ＲＶ或临床分离菌株菌液，置３７℃恒温培养箱培养６周，２周后开始观察结核分枝杆菌的生长情况，以后每周观察。记录结果。2结果2.1葎草不同提取部位的抑菌作用葎草的５种不同提取部位对结核杆菌生长的抑制作用见表１。由表１可知，石油醚、正丁醇和水提取部位有抑菌作用，而以正丁醇提取部位最强。因此，又对正丁醇提取部位做进一步的抗菌活性研究。表1葎草不同提取部位对结核杆菌生长的抑制作用（略）“-”无菌落生长;“+”有菌落生长2.2不同浓度的正丁醇提取物对结核杆菌生长的影响正丁醇提取物用５０％乙醇配制成１２ｍｇ·ｍｌ－１的供试药液，再用生理盐水以２倍稀释法制成１∶１

7、，１∶２，１∶４，１∶８，１∶１６等５个浓度，按上述方法制备不同浓度含药培养基，同时设不含药液之空白对照管。分别接种结核杆菌标准株和临床分离菌株，每株结核菌和每个药物浓度均各设３个复管。结果见表２。表２正丁醇提取物对结核杆菌的抑菌作用（略）“－”未见菌落生长；“＋”有个别菌落；“＋＋”有少量菌落；“＋＋＋”菌落数较多；*未做由表２可知，葎草的正丁醇提取物对结核分枝杆菌标准株Ｈ３７ＲＶ及临床分离的敏感菌株都具有较明显的抗菌作用，粗提物的ＭＩＣ为１２５μｇ·ｍｌ－１，高浓度时１ｍｇ·ｍｌ－１，第６周也未发现菌落，对结核分枝杆菌有较强的抑制或杀灭作用。3

8、讨论上述实验研究结果表明，葎草的提取物中以正丁醇萃取物的抗结核分枝杆菌作用最强，且有明显的剂量－效应关系，粗提物在１ｍｇ·