重度妊高征胎盘组织细胞凋亡与hsp70, bax的表达论文

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1、重度妊高征胎盘组织细胞凋亡与HSP70,bax的表达论文王林，辛晓燕，王哲，谢学军【关键词】妊娠并发症【Abstract】AIM:Tostudytherelationshipbetples25unplicatedthirdtrimesterpregnanciesandfrom25casesofSPIH.Lightmicroscopyandelectronmicroscopymunohistochemicalstaining.TheexpressionofHSP70proteinonstratedanthirdtrimesterplacentaltissues.Medians

2、andinterquartilerangesofSPIHgroupalcontrolalcontrol,theexpressionofHSP70increasedinplacentasofSPIHgroup.Thepositiveratesofbaxultaneous.TheexpressionofHSP70doesnotincreaseresistancetoplacentalapoptosisinSPIHanditmayplayaroleinthepathophysiologicmechanismofPIH.【Key×2cm×1cm的组织（避开钙化灶）.生理盐水冲洗后，

3、每块标本切取约1cm×1cm×1cm的组织，40gL1PBS甲醛溶液固定.用于电镜检查的组织放入25gL1的戊二醛液中固定.其余部分立即置入-70℃冻存.前者常规石蜡包埋，4μm连续切片备染.1.2.2光镜、电镜检查所有的标本均行光镜检查.切片用苏木精伊红染色，分别由两人观察，双盲操作.每张切片观察10个高倍视野，蜕膜组织细胞不计数在内.使用透射电镜各检查4例SPIH及正常胎盘组织.所检标本与相对应的光镜检查切片取自同一胎盘组织块.1.2.3免疫组化切片脱蜡后行抗原修复，分别滴加HSP70及bax抗体4℃过夜；DAKOEnVision加入后温育1h，DAB显色.苏木精复染，

4、脱水封片.光镜观察.阳性结果为细胞内有棕黄色颗粒出现，依显色程度分3级：阴性无显色，浅棕黄色为阳性，棕褐色为强阳性.1.2.4gCl21mmolL1,EGTA1mmolL1,PMSF0.1mmolL1,βmercaptoethanol5mmolL1,CHAPS5gL1,.freelLL1），置入匀浆器中捣碎，冰浴30min后，低温高速离心12000g，30min，取上清液.紫外线分光光度计测样品浓度，等量蛋白上样进行SDSPAGE电泳.100V恒压电泳约3h后，转印于硝酸纤维素膜.用小牛血清白蛋白封闭，加入1100稀释的HSP70抗体，4℃过夜后，37℃复温1h.110稀释

5、的鼠抗DAKOEnVision放大信号，DAB显色后照相.图像分析，测表达蛋白的灰度值.统计学处理：应用SPLM统计学软件包.两组细胞凋亡的显著性检验用MannicroscopyofplacentaltissueofSPIH,Apoptoticnucleiesterplacenta,transmissionelectronmicrographshomunohistochemicalstainingofHSP70inplacentaltissueofnormalcontrol×400（略）1:Ｎormalcontrol;2:SPIH;3:Marker.图4等报道，HSP70在

6、正常胎盘的多种细胞中有表达［13］.本研究支持这一观点，且表明HSP70在SPIH的胎盘中表达上调.这对胎盘滋养细胞有一定的保护作用，提高了胎盘组织对上述病理改变的耐受性.HSP70与细胞凋亡的关系，目前意见不一.以往通过对肿瘤细胞凋亡的研究，有学者认为HSP70是除bcl2之外重要的抗凋亡蛋白.但近期有研究提示，HSP70没有抗细胞凋亡的作用［6］.从本实验结果分析，HSP70在SPIH组表达上调与以往认为的其抑制凋亡的作用不一致.类似的结果在其他组织的细胞凋亡研究中也有报道［14］.bax是一种细胞凋亡的促进因子，与bcl2有21%的同源性，可在细胞内形成bax/bcl

7、2异二聚体和bax/bax同二聚体.其高表达可引起细胞线粒体通透性增加，加速细胞凋亡［7］.本实验中bax在SPIH胎盘组织中表达上调与细胞凋亡增加有一致性，可认为是介导胎盘凋亡的途径之一.对凋亡的深入研究发现，其机制复杂.诱发细胞凋亡除p53，bax；Fas，caspase等多种途径外，也可以不通过受体配体系统直接引起细胞凋亡［15，16］.本研究中HSP70不能抑制胎盘细胞凋亡的增加，亦不影响促凋亡因子bax的过表达.但作为应激蛋白（Stressprotein,SP），妊高征的胎盘缺氧、绒毛纤维素样坏死增多等变