胃泌素和胆囊收缩素对胆管癌细胞浸润和转移的影响

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1、胃泌素和胆囊收缩素对胆管癌细胞浸润和转移的影响作者：张罕松王曙光聂洪峰【摘要】目的观察胃泌素（gastrin）及胆囊收缩素（CCK）对胆管癌细胞浸润转移的影响。方法用Transid）可抑制该作用。结论胃泌素和胆囊收缩素可促进胆管癌细胞浸润和转移，而丙谷胺可抑制该作用。【关键词】胆管癌;胃泌素;胆囊收缩素【Abstract】ObjectiveTostudytheeffectsofgastrinandcholecystokinin（CCK）ontheinvasionandmetastasisofthebileductcarcinoma.MethodsBileductcancerce

2、llstrainQBC939berassayinvitroe-tastasisofQBC939cells.TheinfluenceofCCK，gastrin，andproglumideontheprotEinexpressionofMMP-2andMMP-9orcells'abilityoftrans-matrigel，andenhancedtheprotEInexpressionofMMP-2andMMP-9.Theantago-nistoftheCCKandgastrinreceptors，proglumide，inhibitedtheireffectsontheenhan

3、cementofboththeexpressionoftheMMP-2andMMP-9andtheadhesionofbileductcancercellstothematrigel.ConclusionsGastrinandCCKcanenhancetheinvasionandmetastasisofthebileductcancercellthroughthegastrin/CCKreceptorpathayberelatedtotheup-regulatedexpressionofMMP-2andMMP-9.【Keyid）、Matrigel胶，购自Sigma公司。Tran

4、sega，PVDF膜购自美国Sigma公司。Tripureisolationreagent购自Roche公司。1.2人胆管癌QBC939细胞株为第三军医大学全军肝胆外科研究所王曙光教授建株并提供。QBC93910%胎牛血清（FBS）的RPMI1640培养基5～6ml于37℃，CO2的体积分数为5%培养箱中培养。一般3～4代传1次。实验采用对数生长期细胞，消化传代后，在小牛血清的质量分数为10%的DMEM培养基中培养贴壁，再换成无血清培养液，体外无血清培养的胆管癌细胞分别加入各药品终浓度为1×10-6mol/L的胃泌素、CCK及丙谷胺。1.3检测指标及方法1.3.1Transol

5、/L的胃泌素（组）、CCK（组）、胃泌素+丙谷胺（组）及CCK+丙谷胺（组）的培养液稀释至5×104/ml，振荡混匀，备用。将25μl1mg/ml的Ma-trigel胶分3次均匀涂于Transin，紫光灯下放置30min使其胶化。取1室，加入考马斯亮蓝检查有无渗漏。将上述制备的各组细胞悬液75μl，分别加入Transin，常规HE染色。400倍光镜下观光察，随机取5个高倍视野，计数透过膜细胞数。1.3.2MP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达分组情况及细胞准备同前。收集待测细胞样本，用细胞裂解液充分裂解抽提后，采用Log/ml。置于10%聚丙烯酰胺凝胶上电泳数小时，电

6、转移至PVDF膜上，加上特异性抗体孵育4℃过夜（约12h）。将膜与HRP标记的第二抗体孵育37℃2h。经DAB显色后，扫描后于Mias图象分析系统中分析，蛋白含量以Volume值表示（Volume:D（λ）×mm2）。2结果2.1侵袭小室实验结果每个小室随机抽取5个视野，计算每个视野的细胞总数。结果发现，经胃泌素及胆囊收缩素刺激后，胆管癌细胞穿过Matrigel胶的细胞数明显高于对照组（P<0.05），而加用丙谷胺后，穿过的细胞数比胃泌素及胆囊收缩素组明显降低，与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。这提示在经胃泌素与胆囊收缩素刺激后，胆管癌细胞的体外侵袭力升

7、高，结果见表1。2.2MP-2及MMP-9的表达运用Mias软件分析各条带的积分光密度值，发现经胃泌素刺激后，胆管癌细胞合成MMP-2及MMP-9增加明显，与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05），而丙谷胺可抑制该作用，说明胃泌素和胆囊收缩素可以促进MMP-2及MMP-9的生物合成，见图1、2及表2。表1各组间穿过Matrigel胶的细胞数量比较对照胃泌素胃泌素+丙谷胺CCKCCK+丙谷胺计数16.07±13.8328.40±13.57a17.53±15.77b34.47±30.6