阻断肾素.血管紧张素系统对糖尿病大鼠肾脏血管紧张素ⅱat1受体的

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1、阻断肾素.血管紧张素系统对糖尿病大鼠肾脏血管紧张素ⅡAT1受体的张莉，马骥，顾勇，林善锬【关键词】糖尿病肾病　　Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectofperoxiredoxin1（Prx1）overexpressiononresistanceofhumantumorcellstohydrogenperoxide.MethodspcDNA.Prx1plasmidanPC3prostatecancercells.TTassayonitoredbyol・L-1ofhydrogenp

2、eroxide，thePC3cellsstablytransfectedanPC3prostatecancercellstohydrogenperoxide.　　Keyalcontrolgroup，NC组）。　　1.2糖尿病动物模型制作　　除正常对照组大鼠外，其余大鼠按55mg・kg-1体重一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ，Sigma公司），48h后尾静脉采血，用快速血糖仪［oneTouchⅡ型，强生（中国）有限公司］测定全血血糖，血糖>16.7mmol・L-1同时用尿糖试纸测定尿糖+++～++++者

3、确定为糖尿病大鼠。成模后稳定4～5d开始用药干预，伊贝沙坦和福辛普利溶解于磷酸盐缓冲液中制成7mg・ml-1的溶液（pH7.4），每日1次灌胃给药，剂量:伊贝沙坦组和福辛普利组均为40mg・kg-1・d-1;合用组为两药各20mg・kg-1・d-1;对照组仅给予等量磷酸盐缓冲液灌服。观察时间为4周。整个实验期间不使用胰岛素。1.3标本制备　　实验第4周末，大鼠空腹16h后在3%水合氯醛1ml・（100g）-1腹腔注射麻醉下行腹主动脉插管，收集2ml全血

4、，注入预冷的含20μlEDTA的离心管，4℃离心（1500r・min-1）5min分离血浆。取1ml血浆，放入另一管已预冷的含有10μl酶抑制剂1和20μl酶抑制剂2（试剂盒中提供）的试管中摇匀，置于-20℃冰箱保存，待测AngⅡ。其余血标本待作生化检测。取血毕，经腹主动脉注入4℃预冷的生理盐水反复灌洗至肾脏转为苍白，分离肾脏，截取厚度2mm左右的一片肾组织置于4%的中性甲醛缓冲液中固定。其余肾组织于液氮中暂存。　　1.4实验方法　　1.4.1血糖测定　　由日立7170型全自动生化分析仪测得。1.4.2血浆AngⅡ水平测

5、定采用放射免疫法（试剂盒购自中国原子能科学研究院）测定。1.4.3免疫组织化学法检测肾脏AT1受体表达　　肾组织标本固定48h，石蜡包埋，切成4μm厚切片，常规脱蜡至水，1.5%H2O2.甲醇处理，加一抗1∶100兔抗大鼠AT1抗体（SantaCruz公司），4℃过夜，加二抗.HRP复合物（AntibodyDiagnosticaInc.）于37℃孵育30min，DAB（AntibodyDiagnosticaInc.）显色4min，苏木素复染。阳性组织呈棕黄色，而阴性部分呈蓝色。　　1.4.42）来表示。　　1.5统计学处理　　实验数据

6、以ˉx±s表示，采用SPSS10.0统计软件进行分析，组间比较用方差分析或非参数检验。(责任编辑：)　　2结果　　2.1各组血糖、AngⅡ水平的变化　　SD大鼠腹腔单剂量注射STZ后观察4周，模型组动物血糖水平明显升高，说明已经成功建立糖尿病动物模型。各用药组血糖水平与DC组相比无显著性差异，提示在本研究观察期间，各药物干预对糖尿病大鼠的糖代谢无显著影响。DC组血浆AngⅡ水平较NC组下降但尚未达到统计学差异（P>0.05），Ⅰ组AngⅡ水平较DC组和NC组分别增高达3.7倍和2.4倍。F组和IF组较DC组无明显变化。提示各药物

7、干预对循环AngⅡ的影响是不同的（表1）。表1各组大鼠血糖、AngⅡ水平变化比较（略）　　2.2各组大鼠肾组织AT1受体免疫组织化学结果　　如图1所示，在正常大鼠肾脏，AngⅡ的AT1受体主要表达在近端小管、入出球小动脉、系膜区、致密斑等部位。糖尿病大鼠除近端小管仍有明显表达外，其它部位的染色明显减弱。各用药组的AT1受体表达明显上调，特别在系膜区、毛细血管脏层上皮细胞、远端小管等部位免疫染色较糖尿病对照组及正常组均显著增强。　　3.3各组大鼠肾组织AT1受体，ANDERSONS.RoleofangiotensinⅡindia-bet

8、icnephropathy［J］.SeminNephrol，1997，17:441.447.［2］TAALM.RenoprotectivebenefitsofRASinh-ibition:fromACEItoangiot