大鼠肢体缺血再灌注早期血栓前状态的研究

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1、大鼠肢体缺血再灌注早期血栓前状态的研究作者：杨敏，马平，徐文会，张宏江【摘要】目的探讨大鼠急性下肢缺血再灌注早期血栓的形成情况。方法将大鼠随机分为假手术组、下肢缺血再灌注组两组。夹闭大鼠股动脉并用张力带绑扎下肢，建立急性下肢缺血再灌注大鼠模型。观察急性下肢缺血再灌注大鼠血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa和血管内皮细胞血栓调节蛋白(thrombomoclulin，TM)的表达。结果缺血再灌注组大鼠血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa表达高于假手术组(P＜0.05)；缺血再灌注组大鼠血管内皮TM表达低于假手术组(P＜0.05)。结论急性下肢缺血再灌注可能导

2、致大鼠血栓前状态的形成。【关键词】肢体缺血再灌注；血栓前状态；血小板膜糖蛋白；血栓调节蛋白Abstract：ObjectiveToinvestigatetheemergeconditionofthrombinratsafterischemiareperfusionoflimb.MethodsTheratslydividedinto2groups：shamoperationgroup(Ngroup)；thehindlimbischemiareperfusiongroup(IRgroup).Ananimalmodelofacutehindl

3、imbischemiareperfusionpingfemoralarteryandbandinghindlimbofrats.ChangesintheexpressionofGPⅡb/ⅢaofplateletmembraneandTMofvascularendothelialcellinratsafterischemiareperfusionoflimbembraneintheIRgroupbischemiareperfusionmayinducetheformationofprethromboticstateinrats.Key

4、bischemiareperfusion；prethromboticstate；plateletmembranelycoprotEin；thrombomodulin缺血再灌注损伤是临床肢体血运重建后出现意外致残、致死的主要原因之一，是当今外科临床医生所常面对的具有挑战性的问题之一。创伤、断肢再植、术中使用止血带时间过长、腹主动脉瘤手术中钳夹血管及大血管栓塞再通等都可引起肢体缺血再灌注损伤。肢体缺血再灌注损伤是处于顿抑、休眠的肢体在血运重建之后的损伤导致的机体生理、生化改变和各器官的病理改变，这种损伤几乎影响到整个机体，进一步导致如心、肺

5、、肾等远隔器官的损伤［1～3］，甚至发生多器官功能障碍［4］。尽管近来手术技术得以改善且围手术期管理水平有所提高，但死亡率和截肢率仍居高不下。如何认识再灌注损伤的预防和治疗，降低致残率和死亡率，将是我们长期所要研究的课题。缺血再灌注损伤的机制是多因素和错综复杂的，其中微血栓的形成可能起到重要作用。研究证实再灌注时血管内皮细胞和白细胞激活，内皮细胞释放多种黏附分子，激活的内皮细胞与白细胞相互作用，对微血管和细胞损伤产生影响。150多年前，Virchobomoclulin，TM)的测定，从血管内皮损伤、血小板活化、抗凝作用减弱三个方面对肢体缺

6、血再灌注后血栓前状态进行研究。1材料和方法1.1实验材料1.1.1实验动物健康成年雄性SD大鼠，体重(200±30)g，购于山西医科大学实验动物中心。1.1.2主要试剂及仪器山羊抗大鼠GPⅡb/Ⅲa抗体，SANTACRUZ公司；抗大鼠TM抗体，LABVISION公司；FITC标记兔抗山羊IgG，北京中山金桥公司；SABC免疫组化试剂盒，北京中山金桥公司；OlympusBX51光学显微镜，日本；LEIcaRM2015切片机，德国莱卡公司；IDA2000数码显微图象分析系统，中科院北京空海科技公司；Calibur流式细胞仪，美国BD公司。

7、1.2实验方法1.2.1实验分组分为假手术组、缺血再灌注组两组，采用随机化原则，每组8只。1.2.2动物模型制作术前常规禁食12h，自由饮水。以20％乌拉坦(1000mg/kg)行腹腔内注射麻醉。将大鼠仰卧固定于操作台上，在后肢双侧股三角处剪毛，于腹股沟处沿血管走行纵行切开皮肤、皮下组织，钝性分离缝匠肌后部，游离股动脉、股静脉和股神经。在股动、静脉近端分别用动、静脉夹夹闭，并用张力带于股鞘下绑扎肢体阻断侧支循环。右颈部开口分离颈内静脉，置管建立静脉输液系统，接微电脑静脉微量输液泵。2h后撤除血管夹，恢复动、静脉血流，3h后进行标本采集。1

8、.2.3实验动物的处理假手术组与缺血再灌组相同的麻醉与手术操作，但未行血管夹闭及张力带绑扎；缺血再灌注组缺血2h，再灌注3h。1.2.4标本制备和检测方法检测GPⅡb/Ⅲa需取血，从心脏采血0