藏药川西獐牙菜挥发性化学成分及抑菌活性研究论文

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1、藏药川西獐牙菜挥发性化学成分及抑菌活性研究论文张应鹏杨云裳刘宇马兴铭【摘要】目的研究川西獐牙菜挥发油的化学组成及其抑菌活性。方法采用水蒸气蒸馏法提取挥发油，用GC-MS进行成分分析；选择金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、伤寒沙门氏菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌为代表菌种，对挥发油的抗菌活性进行了初步研究。结果分离出88种成分，鉴定出61种化合物，其峰面积相对含量约占挥发油总量的91.32%。川西獐牙菜挥发油的主要组分为二十六烷(12.88％)，二十八烷(17.83％)，1-碘-十六烷(7.27％)，11十烷基二十一烷(5.47％).freelussotiiFranc

2、h，龙胆科獐牙菜属,一年生草本,高15～60cm，主根黄色，生于海拔3600～3800m的山坡、灌丛草地、林缘、河滩等［1］，在我国四川的西部,西藏及甘肃的海西、海北、黄南、玉树、果洛等地区均有分布。川西獐芽菜也称为藏茵陈,是特种藏药,用于治疗消化不良、胆囊炎、各型肝炎、急性骨髓炎、急性结膜炎、急性咽喉炎及烫伤,也用于风火牙痛、热淋等症［2，3］。目前对獐牙菜属的药理和化学性质的研究已有诸多报道［4］。但是，川西獐牙菜挥发性化学成分尚未见文献报道，笔者在研究印度獐牙菜挥发性化学成分的基础上［5］，继续对川西獐牙菜的挥发性化学成分和抑菌活性加以研究。1器材1.1

3、药材川西獐芽菜，200311购买自青海湟中藏医院，植物标本由兰州大学生命科学院张国梁教授鉴定，植物标本现存放于兰州理工大学石油化工学院有机与药物化学研究室。1.2试剂与菌株MH琼脂、MH肉汤、平板菌落计数琼脂:杭州微生物试剂厂；细菌菌株：金黄色葡萄球菌CMCC(B)ATCC25923，大肠埃希菌CMCC(B)ATCC25922：枯草芽孢杆菌O901，铜绿假单胞菌ATCC27853，伤寒沙门氏菌ATCC6539，兰州大学基础医学院免疫学教研室提供。所用试剂均为分析纯。1.3仪器HP6890-5973GC/MS联用仪(美国惠普公司);气相色谱条件：色谱柱为SE-5

4、4（30m×0.25mm,33.0μm）；柱温为40℃，以5℃·min-1的速率升至260℃，保持40min;进样口温度为260℃；载气为He气，流速为0.3ml·min-1；进样量为0.2μl，分流比为50∶1。质谱条件：离子源为EI，电子能量为70eV,接口温度为280℃，质量范围为1～550amu，溶剂延迟0min。2方法与结果2.1挥发油的提取取川西獐牙菜干燥全草50g粉碎，加入200ml蒸馏水进行水蒸气蒸馏8h，收集馏出液700ml。萃取时，加入50g氯化钠，以减少挥发性成分在水中的溶解度，用乙醚萃取馏出液6次，合并乙醚萃取液，用无水硫酸钠干燥萃取液

5、1h，在30℃条件下回收乙醚，得到浅黄色油状物,提取液具有特殊芳香气味，密封保存，供分析用。2.2成分鉴定在上述色谱条件下进样，得到黄花补血草挥发油的总离子流图(见图1)。启动HP689OMS化学工作站，检索NIST98谱图库，结合有关文献人工检索确定其化学组成［6］（见表1）。另外，通过与正烷烃化合物的保留时间比较，采用线性插入的方法计算各化合物在挥发油中的百分含量。各成分的保留指数，与文献［7，8］化合物的保留指数进行比较，进一步确证各化合物。按峰面积归一化法计算各化合物在挥发油中的百分含量，具体分析结果见表1。2.3抗菌活性分析［9］2.3.1菌液制备取

6、实验菌株接种于MH琼脂平板培养基中，35℃培养14h，用MH液体培养基制备菌悬液，菌液浓度1.5×108CFU·ml-1备用。2.3.2含药物纸片制备将药物溶解后，灭菌备用。每张纸片（直径6mm）加药物样品10μl，阴性对照是助溶剂，空白对照生理盐水；阳性对照是庆大霉素溶液。2.3.3K－B法取菌液浓度为1.5×108CFU·ml-1的菌株0.2ml，均匀涂布整块MH琼脂培养基表面，室温2～5min后，贴加含药纸片，置入35℃恒温培养箱培养16～18h，精确测定其纸片周围抑菌环直径的大小，结果以毫米（mm）表示。见表2。2.3.4挥发油浓度助溶剂为DMSO，浓

7、度Ⅰ：10mg/ml；浓度Ⅱ：22mg/ml；浓度Ⅲ：46mg/ml。3讨论通过GC/MS分析,从川西獐牙菜挥发油中共分离出88个化合物,鉴定了其中61个，占化合物总数的51.1%，所鉴定的化合物含量占全挥发油的82.12%。分析鉴定结果表明，川西獐牙菜挥发油的主要组分为烷烃，分别为二十六烷(12.88％)，二十八烷(17.83％)，1-碘-十六烷(7.27％)，11-十烷基-二十一烷(5.47％)，2-十二烷氧基-乙醇(3.04％)，2-环己基-十一烷(2.19％)，1-碘-十八烷(3.21％)，四十四烷(5.47％)，二十九烷(4.29％)，11-十烷基-

8、二十一烷(5.47％)，三十烷(3.1