rphplc法测定脑得生片中羟基红花黄色素a的含量论文

《rphplc法测定脑得生片中羟基红花黄色素a的含量论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、RPHPLC法测定脑得生片中羟基红花黄色素A的含量论文【摘要】目的采用反相高效液相色谱法建立了测定脑得生片中羟基红花黄色素A含量的方法。方法采用超声波法提取，经大孔树脂HP20纯化后，以反相高效液相色谱法测定羟基红花黄色素A的含量。色谱柱为PhenomenexLunaC18（5μm，3.9mm×150mm），流动相为甲醇乙腈0.7%磷酸溶液(体积比21∶5∶74)，流速1.0mL·min-1，柱温30℃，检测波长403nm。结果羟基红花黄色素A在1.22～9.15μg/mL范围内线性关系良好.freelpoenexLunaC18

2、(5μm，3.9mm×150mm)色谱柱；流动相为甲醇乙腈0.7%磷酸(体积比21∶5∶74)；检测波长为403nm；流速为1.0mL·min-1；柱温为30℃。理论塔板数以羟基红花黄色素A计算不低于3000；分离度大于1.5；重复性RSD为1.58%；羟基红花黄色素A峰的拖尾因子为1.03。色谱图见图1。图1羟基红花黄色素A对照品（A），阴性对照（B），供试样品(C)色谱图（略）Fig.1HPLCchromatogramsofreferencesubstance(A),negativereferencesubstanceHSYA

3、(B)andsample（C）2.2溶液的制备2．2.1对照品溶液的配制取羟基红花黄色素A对照品1.0mg，精密称定，置10mL容量瓶中，加入30%（体积分数）甲醇5mL，超声溶解后，用30%（体积分数）甲醇定容至刻度。精密移取5.0mL，加30%（体积分数）甲醇稀释至10.0mL，揺匀，制得质量浓度为0.061mg·mL-1的对照品溶液，密封保存，备用。2．2.2供试品溶液的制备取脑得生片20片，去糖衣，研细。取1.0g，精密称定置具塞锥形瓶中，加入30%（体积分数）乙醇50mL，超声提取30min，滤过，滤液于50℃下减压回收至无

4、醇味，然后加纯净水20mL分散，水分散液过HP20型大孔树脂柱(内径1.5cm，长10cm)，以50mL水洗脱，弃去水液。再用30%（体积分数）乙醇洗脱，收集50mL，旋蒸仪浓缩至干，加30%（体积分数）甲醇溶解转移至25mL容量瓶中，用30%（体积分数）甲醇定容至刻度，揺匀，即得。2.2.3阴性对照溶液的制备按脑得生片处方比例制成不含红花的阴性对照样品，依“2.2.2”项方法制得阴性对照溶液。2．3阴性对照试验分别取供试品溶液，阴性对照溶液及对照品溶液，以10μL进样量，在色谱条件下进行测定，结果表明，阴性无干扰，见图1。2．4线性

5、范围精密吸取“2.2.1”项对照品溶液0.20mL，0.40mL，0.60mL，0.80mL，1.00mL，1.50mL，置10mL容量瓶中，以30%（体积分数）甲醇稀释至刻度，摇匀，制得系列浓度对照品溶液。分别进样10μL，按“2.1”项下色谱条件测定HSYA的峰面积，以对照品质量浓度（ρ）为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，计算回归方程为：A=5.07409×105ρ-3.2829×104，r=0.9998，结果表明HSYA在1.22～9.15μg/mL范围内与峰面积具有良好的线性关系。2．5精密度试验分别精密吸取同一批HSYA对照品

6、溶液10μL，按“2.1”项下色谱条件进样，平行测定6次，测得平均峰面积为3087600，RSD为2.16%。2．6稳定性试验取同一供试品溶液(批号为070302)，每2h进样1次，体积均为10μL，按“2.1”项下色谱条件测定6次，测得样品中HSYA的平均质量浓度为0.0427mg·mL-1，RSD%为0.87%。结果表明，供试品溶液在10h内稳定。2．7重复性试验取同一批号样品(批号为070302)，6份各约1g，精密称定，按“2.2.2”项制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件测定。测得样品中HSYA的平均含量为1.0569mg

7、·g-1，RSD为1.29%。结果表明，样品重复性良好。2．8加样回收率试验取6份已知含量的供试品1g，精密称量，置于具塞锥形瓶中，分别加入浓度为0.059mg/mL的HSYA对照品溶液10mL，照“2.2.2”项方法制备供试品溶液，按“2.1”项色谱条件测定，计算HSYA的回收率，结果平均回收率为100.93%，RSD为1.73%。2．9样品含量测定取3批样品（批号20070302、20070312、20070322），按“2.2.2”项方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，在色谱条件进行测定，采用外标一

8、点法计算样品中羟基红花黄色素A的含量。3批样品的测定结果分别为0.3171、0.3264、0.3162mg/片。3讨论3．1HSYA提取方法的优选［4］：曾分别采用水、30％（体积分数）乙醇、60％（体积分数）乙醇等为溶