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《大孔树脂分离纯化翻白草中总黄酮优化工艺研究论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、大孔树脂分离纯化翻白草中总黄酮优化工艺研究论文李胜华，伍贤进，刘惠君【摘要】目的研究大孔吸附树脂分离纯化翻白草中总黄酮的工艺条件。方法比较AB-8，NKA，NKA-9，D-152，D-101，ADS-17等6种大孔吸附树脂对翻白草总黄酮的静态解吸率。结果D-101型树脂对翻白草中总黄酮有最好的吸附分离性能。D-101型大孔树脂分离纯化翻白草黄酮的最佳工艺条件为:柱体积为160ml,翻白草提取物上样量为62.5mg/ml(以湿树脂体积计),先用pH4的蒸馏水淋洗,再用30%的乙醇洗脱,洗脱剂用量为2.5～3倍湿树脂体积。结论D-101型树脂是分离纯化翻白草黄酮的适宜大孔树脂.
2、freelin,过滤，减压浓缩回收乙醇，静置冰箱过夜，过滤除去叶绿素备用。2.2标准曲线的制备精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品10.00mg，置于50ml的容量瓶中，加95%的乙醇30ml，置于水浴上微热溶解，放冷，加乙醇稀释至刻度，摇匀，即为浓度为0.2mg/ml的芦丁标准品溶液。精密量取已制备的对照品溶液0，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0ml，分别置于10ml具塞试管中，加1.0ml亚硝酸钠(1：20)溶液，混匀，放置6min，加0.5ml硝酸铝(1：10)溶液,混匀，放置6min，加1mol/L的氢氧化钠4ml，再加水至刻度，摇匀，放置15min，
3、用分光光度法在λ＝500nm处测定吸光度，用最小二乘法作线性回归得芦丁浓度（Y）与吸光度（X）的关系曲线的回归方程式：Y＝0.8577X-0.0005，R2＝0.9992。2.3大孔树脂的处理将AB-8，NKA，NKA-9，D-152，D-101，ADS-17大孔树脂依次用2倍体积5%NaOH水溶液浸泡24h，1倍体积蒸馏水，2倍体积10%盐酸洗涤，最后用蒸馏水洗至中性。以乙醇湿法装柱，用93%乙醇在柱上流动淋洗，不时检查流出的乙醇液，至乙醇液与水混合(1∶5)无白色浑浊为止，然后以大量蒸馏水洗去乙醇。2.4大孔树脂的筛选将浓度为50mg/ml的翻白草提取物水溶液分别通过6
4、种不同型号的已预处理好的树脂柱，进行动态吸附。用1%FeCl3检查流出液,待反应呈阳性(检测显色)时，表明已有黄酮流出,树脂吸附达饱和，停止上样,记录上柱量，计算总黄酮吸附量，单位为mg/ml。上样后的树脂柱先用水洗至无色并用浓硫酸检测至无糖反应，再用93%乙醇洗脱至洗脱液无色止。将乙醇洗脱液蒸干、称重、测定总黄酮含量、计算总黄酮回收率。总黄酮吸附量及总黄酮回收率分别按公式(1)和(2)计算:A=BV(1)R=(ET)×100(2)式中A:总黄酮吸附量（mg/ml）；B:被树脂吸附的黄酮总量（mg）；V:湿柱体积（ml）；R:总黄酮回收率（%）；E:93%乙醇洗脱液中黄酮总
5、量（mg）；T:上柱总黄酮量（mg）。2.5D-101大孔树脂柱纯化翻白草黄酮类化合物工艺的确定2.5.1上柱条件的确定分别称取5.07，10.01，15.17，20.53g粗提物,溶于50ml水中，上柱(柱体积为160ml)，吸附30min后，先用大量水淋洗，直到洗脱液无色并用浓硫酸检测不出糖为止，然后用93%的酒精洗脱至AlCl3检测呈阴性(不显色)，收集洗脱液,.freell水中，上柱后，分别用不同pH值的水充分淋洗，直到用浓硫酸检测无糖反应为止，再用93%的酒精洗脱，直到用1%FeCl3检测不显色为止，收集洗脱液，测总黄酮含量和回收率。2.5.3洗脱条件的确定洗脱剂
6、的确定：称取10g粗提物，溶于50ml水中，上柱后先用大量水淋洗至淋洗液无色并用浓硫酸检测不出糖，然后分别用30%，50%，70%，93%的乙醇洗脱,将乙醇洗脱液分别蒸干、称重、测定总黄酮含量、计算总黄酮回收率。洗脱剂pH值对翻白草黄酮纯化效果的影响：称取10g粗提物,溶于50ml水中，上柱后，先用水充分淋洗,至淋洗液无色并用浓硫酸检测不出糖为止，然后用pH值分别为2，3，4，5和6的93%的乙醇洗脱，至5%FeCl3检测不显色为止，将乙醇洗脱液分别蒸干、称重、测定总黄酮含量、计算总黄酮回收率。洗脱曲线的考察：按前面所确定的吸附、洗脱条件,取翻白草提取液上柱、吸附、洗脱(柱
7、体积为160ml),每100ml收集一次,共收集7份,分别测吸光度值,据此绘制洗脱曲线。3结果3.1大孔树脂的筛选大孔树脂由于其理化性质不同对吸附分离的影响很大。由于树脂极性、孔径、比表面积、孔容等不同,故性质不同。在所选择的6种大孔树脂中,NKA和NKA-9为极性,AB-8为弱极性,ADS-17为中等极性,D-101和D-152为弱酸性阳离子交换树脂。由表1可知,D-101型大孔树脂分离纯化翻白草总黄酮效果较好，总黄酮吸附量最高,这是因为翻白草黄酮是一种弱极性物质，在弱极性柱上更容易吸附，同时可能是因为比表面积较
