内皮素与平滑肌肌动蛋白在视网膜增殖膜中的表达论文

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1、内皮素与平滑肌肌动蛋白在视网膜增殖膜中的表达论文.freeloothmuscleactin;immunohistochemicalstainingsAbstract:AIMTodiscusstheexpressionofendothelineandalphasmoothmuscleactininperiretinalmembraneofprolif-erativevitreoretinopathy（PVR）.METHODS14periretinalmembranes（PCM）obtainedfrom14casesofPVRent（RD）undergoingvi

2、tretomyinetheexpressionofendotheline-1（ET-1）andα-SMAbyimmunohistochemicaldetection.RESULTSThereac-tionsofET-1a-trix（ECM）inthevariousgradesofthePRMsanddarkenattherimofthePCM，ineofcytonucleusbecametheshapeoffusiformand/orslimerandlonger.AayexpressETandsecretittoECManddeliveref-fectson

3、thecontractivecellsthatexpressα-SMA.0引言增生性玻璃体视网膜病变（proliferativevitreo-retinopathy，PVR）是眼内过度修复过程，是视网膜脱离和手术失败的主要原因.内皮素（endotheline，ET）参与机体血管生理和细胞增殖活动的调节［1，2］，促进修复细胞分泌细胞外基质和肌动蛋白并引起其收缩［3］.而α-平滑肌肌动蛋白（alphasmoothmuscleactin，α-SMA）是细胞移行和具有收缩功能的基础.司艳芳等［4］的研究提示随着增生膜的发展α-SMA表达增强.但ET与α-SMA在PV

4、R的增生膜中相互作用却未见报道.本实验讨论ET和α-SMA在其收缩中的相互关系.1材料和方法1.1材料2000-07/2001-11本院眼科确诊为孔源性视网膜脱离（RRD）伴PVR患者14例，年龄4～63岁，病程2mo～2a.PVR分级标准参照1983年美国视网膜学会分级方法，分级为C3～D3.以上患眼行玻璃体切割术时取视网膜表面增生膜，其中下膜5例，前膜9例.以上组织用40gL-1多聚甲醛固定30min，4℃.经脱水、透明制成蜡块.最后制成5μm厚的切片，贴附于用多聚赖氨酸涂片的玻片上.ET-1鼠抗人mAb、鼠抗人α-SMAmAb、S-ABC即用型试剂盒、D

5、AB试剂盒（均为博士德公司提供）.1.2方法切片浸入7.5mLL-1H2O2-PBS，37℃30min，封闭内源性过氧化物酶;正常羊血清封闭消除非特异性染色;滴加α-SMA鼠抗人mAb（1200）和ET-1鼠抗人mAb（1200），湿盒4℃过夜，漂洗5min×3次;滴加生物素化兔抗小鼠IgG（1200），湿盒37℃孵育30min;滴加SABC复合物，37℃孵育30min;DAB显色，显微镜下观察，水洗中止反应;苏木素复染，脱水，透明，封片.2结果在14例不同级别的PRM中ET和α-SMA均有阳性表达，在6例PVR/C3级的PRM中，可见细胞成分较多，细胞间质较

6、少，细胞多为圆形，阳性细胞多（Fig1，3）;在8例D级PRM中，细胞成分较少，细胞间质多，阳性细胞少（Fig2，4）.各级增生膜均可见色素颗粒和团块.在PVR/C3膜中，两者均在膜的边缘浓染，胞体呈梭形，胞核呈圆形或卵圆形的阳性细胞.在细胞较多的区域，阳性细胞数目较多，染色较浅淡，胞体为长圆形，胞核呈圆形，在部分阳性细胞中可见色素存在;ET-1表达的较均匀，不但表达在细胞中，在细胞外基质中也有阳性染色;而α-SMA则主要表达在细胞中，在膜边缘呈节段分布（Fig1，3）.在PVR/D膜中，α-SMA在膜的中央和边缘均见一些强阳性细胞，胞体呈狭长的梭形，与标本的

7、长径走行方向平行（Fig2）;而ET-1在组织的中央区域阳性细胞较少，分布无方向性.在膜表面染色明显加深，细胞外基质中棕色均匀染色.在膜的中央部可见散在的淡染的细胞，细胞和核呈圆形或椭圆形（Fig4）.图1－图4略3讨论ET-1和α-SMA表达有明显的同步现象，即随着细胞向梭形细胞的转化表达增强.同时两者的表达又有差异，在PVR/C3级的PRM中，α-SMA在膜表面呈节段分布，说明其表达在细胞中;而ET-1在膜表面均匀加深，说明不但表达在细胞中而且分泌在细胞外基质中;在PVR/D级的PRM中，α-SMA在膜的中央部位有强表达，阳性细胞与膜的收缩方向平行，而ET

8、-1均匀地表达在膜的中央部，在膜的表面