中药对镍暴露氧化损伤抑制作用

《中药对镍暴露氧化损伤抑制作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中药对镍暴露氧化损伤抑制作用作者：吕晓云，蒲晓丽，陈静，朱玉真，赵健雄，魏虎来【摘要】目的研究灌服中药扶正解毒汤(FJD)后兔血清对硫酸镍(NiSO4)暴露的人支气管上皮细胞(16HBE)自由基含量及8羟基2脱氧鸟苷三磷酸酶(8oxodGTPase)表达的影响。方法体外培养的16HBE细胞分别经NiSO4暴露及NiSO4加扶正解毒汤含药血清共同处理后，采用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)及实时荧光定量RTPCR检测自由基含量及8oxodGTPase表达的变化。结果NiSO4(800μmol/L)暴露的16HBE细胞，其自由基

2、含量及8oxodGTPase表达水平均高于NiSO4与扶正解毒汤(10%)共处理组细胞，Ｐ＜005～001，相对标准偏差(RSD)＞2%。结论8oxodGTPase可作为镍暴露氧化应激的标记物；中药扶正解毒汤通过清除自由基，下调8oxodGTPase的表达，对镍暴露氧化损伤具有显著的抑制作用。【关键词】扶正解毒汤　　本课题组多年进行的体内实验及职业病临床研究表明，中药扶正解毒汤(FJD)具有良好地拮抗镍毒性的作用〔1，2〕。本文从体外途径研究了中药解毒汤对硫酸镍(NiSO4)暴露的人支气管上皮(16HBE)细胞内自由基含量及

3、8羟基2脱氧鸟苷三磷酸酶(8oxodGTPase)表达的影响，旨在为该复方的作用机制补充新的资料。　　1材料与方法　　11材料　　111细胞及动物16HBE细胞(美国ATCC公司)。纯种青紫兰兔8只，雄性，体重(21±03)kg(中国兰州生物制品研究所)，合格证号：14004，常规饲养。　　112中药扶正解毒汤由红芪、当归、丹参、枸杞等组成，以三蒸水煎煮，过滤、浓缩成含生药4g/ml的溶液，高温高压消毒灭菌，密封，4℃以下储存备用。　　113主要试剂及设备基础培养液(MEM)培养基、Trizol试剂盒(美国GI

4、BCO公司)；小牛血清(杭州四季青生物工程材料公司)；乙酰乙酸盐2，7二氯氢化荧光素(D399)(美国MolecularProbes公司)；ExScripＴＭRTreagentKit及SYBRPremixExTaqTM试剂盒(日本TaKaRa公司)；TCSsp2型激光扫描共聚焦显微镜系统(德国LEica公司)；SmartCyclerⅡSystem荧光定量PCR仪(美国PE公司)。人类humanNutThomologue(hMTH1)基因PCR引物设计参照　　表1扶正解毒汤血清对染镍16HBE内自由基含量变化的影响（略）　　注：与阴性

5、对照组比较，aＰ＜005；与NiSO4组比较，bＰ＜005，cＰ＜001　　A：NiSO4组B：扶正解毒汤+NiSO4(Ⅰ)组C：扶正解毒汤+NiSO4(Ⅱ)组　　图1LSCM下16HBE细胞内D399荧光强度(×40)（略）　　23实时定量PCR反应的标准曲线分析hMTH1和βactin定量标准曲线的斜率分别为-10388和-11021，r2分别为09990和09966。表明线性关系良好，在实验浓度范围内能够进行准确定量。　　24扶正解毒汤血清对染镍细胞８oxodGTPase(hMTH1mRNA)表达的影响(表2

6、)与阴性对照组比较，NiSO4染毒组细胞８oxodGTPase表达明显增强(RSD=58%)，且空白血清对此结果无影响；而扶正解毒汤+NiSO4Ⅰ组、扶正解毒汤+NiSO4Ⅱ组细胞８oxodGTPase表达水平则明显低于NiSO4组(RSD分别为67%，63%)。　　3讨论　　８oxodGTPase由hMTH1基因编码，可催化DNA氧化损伤产物8羟基2脱氧鸟苷三磷酸(８oxodGTP)的水解，从而阻止后者向DNA的错误掺入，减少突变。故被视为一种内源性抗氧化、抗突变酶〔6〕，又可作为一种氧化应激的标记物〔3〕。镍

7、化合物可通过诱导氧化应激等途径产生一系列细胞遗传毒性，甚至癌变〔7，8〕。本研究发现，NiSO4(800μmol/L)暴露16HBE细胞16h，其自由基含量及８oxodGTPase表达均明显增强，间接证实了镍暴露16HBE细胞内氧化应激的存在，同时也证明了８oxodGTPase作为氧化应激标记物的作用。16HBE细胞经扶正解毒汤血清与NiSO4共同处理后，其自由基明显降低，而８oxodGTPase的表达水平则无明显增加。提示扶正解毒汤可能通过预防或直接清除方式而减少染镍细胞内自由基的产生，发挥体外抗氧化作用，此与体内实验结果一致

8、〔９，１０〕。同时亦可认为，扶正解毒汤与NiSO4共处理组细胞内８oxodGTPase表达的下调，并非扶正解毒汤血清直接作用的结果，而正是由于扶正解毒汤对ROS迅速而有效的清