蛹虫草菌丝体中腺苷提取工艺的优化

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1、蛹虫草菌丝体中腺苷提取工艺的优化作者：牛双高翔安金双郭憬憬滕利荣逯家辉【摘要】　　目的利用单因素及响应面分析法优化蛹虫草菌丝体腺苷水提工艺。方法通过单因素实验选取实验因素与水平，在单因素实验的基础上，以水料比、提取温度、提取时间为响应因子，以腺苷得率为响应值，进行3因素3水平的响应面实验。结果蛹虫草菌丝体腺苷水提最佳工艺条件为：料水比1∶38，提取温度44℃，提取时间为2.3h。在该最佳工艺条件下蛹虫草菌丝体腺苷得率可达1.44mg/g，与理论计算值1.42mg/g基本一致。结论经响应面法优化所得模型可较好地预测蛹虫草菌丝体腺苷的得率。【

2、关键词】蛹虫草；腺苷；水浸提；响应面分析法　　Abstract：ObjectiveOne-factortestsandResponseSurfaceMethodology(RSM)izingtheilitarismyceliumadenosine.MethodsExperimentfactorsandlevelsple,extractingtemperature,extractingtimeumextractionconditionsedasfollopletoperature44℃,extractingtime2.3h.Inthisst

3、udy,theoptimizedextractionconditionsproducedtheoreticallyextractionrateof1.42mg/gandinpractice1.44mg/g.ConclusionThegoodagreementbetentalresultsverifiedthevalidityofthemodelandexistenceofanoptimalpoint.　　Keyilitaris；Adenosine；ethodology　　蛹虫草Cordycepsmilitaris(L.exFr.)Link

4、又名北冬虫夏草、北虫草等［1］，与冬虫夏草同属异种，是虫草属的模式种,属于子囊菌亚门虫草属，是其寄生在昆虫纲鳞翅目夜蛾科昆虫蛹体上所长出的子座与僵死蛹体的复合体。作为一种具有多种药理功能、抗癌活性的药用真菌蛹虫草［2～4］，随着人们逐渐发现和认识其滋补疗效和提高人体免疫功能的功效，它的开发利用备受关注。　　腺苷是合成三磷酸腺苷(ATP)的主要原料，ATP已被广泛应用于治疗心脏功能不全、脑动脉硬化及肌肉萎缩等症。本实验室通过液体深层发酵获得蛹虫草菌丝体，并利用单因素和响应面法对蛹虫草菌丝体腺苷提取工艺条件进行优化，以提高其腺苷得率，为蛹虫草

5、腺苷产业化生产奠定了一定的理论基础。　　1材料与方法　　1.1材料、试剂与设备蛹虫草（CGMCC5.0699），购于中国科学院微生物研究所。甲醇（色谱纯），葡萄糖，磷酸二氢钾，硫酸镁，维生素B1。磷酸氢二钠、磷酸二氢钠均为分析纯。全自动在位灭菌发酵系统，真空冻干机，德国Eppendorf5810R型高速冷冻离心机，电热恒温水浴锅，漩涡混合仪，高效液相仪，电子天平等。　　1.2方法　　1.2.1菌丝体的预处理将液体深层发酵获得的蛹虫草菌丝体真空冷冻干燥，粉碎，过60目筛用于实验。　　1.2.2菌丝体腺苷的提取方法准确称取0.15g经预处理后

6、的菌丝体，加蒸馏水在恒温水浴锅内浸提一定的时间。8000r/min，离心10min，分离上清液用于腺苷含量测定。　　1.2.3腺苷含量的测定方法根据2005版《中国药典》中介绍的方法，利用高效液相色谱法测定腺苷的含量［5］。流动相为pH6.5的磷酸盐缓冲液∶甲醇（体积比）=85∶15；色谱柱为C18，流速1ml/min，检测波长260nm，柱温35℃，进样量10μl。　　1.2.4菌丝体腺苷得率的计算　　腺苷得率(g)菌丝体质量(g)　　1.2.5菌丝体腺苷单因素提取实验分别以不同的提取温度、料水比、提取时间作单因素实验，考察各单因素对腺

7、苷得率的影响。　　1.2.6菌丝体腺苷提取的中心组合实验根据Box-Benhnken的中心组合实验设计原理［6］，在单因子实验的基础上，确定中心组合实验的因素与水平，以腺苷得率为响应值，通过响应面分析对提取工艺条件进行优化。中心组合实验水平与因素设计如表1所示。　　表1中心组合设计的因素与水平（略）　　2结果　　2.1提取单因素对菌丝体腺苷得率的影响　　2.1.1料水比对菌丝体腺苷得率的影响菌丝体按料水比1∶10，1∶20，1∶30，1∶40，1∶50分别加入蒸馏水，80℃水浴浸提2h。不同料水比腺苷得率结果如图1所示。　　从图1可以看出

8、，腺苷得率随料水质量体积比的增加而增加，在料水质量体积比小于1∶20时，随料水质量体积比的增加，腺苷得率显著增加；在料水质量体积比在1∶20～1∶40时，随料水质量体积比的增加，腺苷得率缓慢增