水溶性阳离子荧光共轭聚合物作为荧光探针测定三磷酸腺苷论文

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1、水溶性阳离子荧光共轭聚合物作为荧光探针测定三磷酸腺苷论文王运王伟何治柯关洪亮【摘要】利用荧光光谱研究了三磷酸腺苷(ATP)与水溶性阳离子荧光共轭聚合物的相互作用，发现加入ATP后，聚合物的荧光强度被显著猝灭，且猝灭程度与ATP的加入量成正比，据此建立了测定ATP的方法。荧光光谱的激发波长选择395nm，发射波长为521nm，激发狭缝宽度为10.0nm，发射狭缝宽度为10.0nm。在0.05mol/LTrisHCl缓冲溶液(pH=7.4)中.freelol/L;检出限为2.0×10-8mol/L;回收率在93.6%～105.6%之间;相对标准偏差在2.2

2、%～6.9%之间。本方法用于三磷酸腺苷二钠药片和鲫鱼肉中ATP的测定，获得满意结果。【关键词】荧光共轭聚合物;荧光光谱;三磷酸腺苷二钠1引言三磷酸腺苷(ATP)是生物体中重要的能量物质1，建立快速、简便监测ATP的方法对于深入研究其功能具有重要意义。目前，测定ATP含量的方法主要有电化学分析法2、生物发光法3、高效液相色谱法4、毛细管区带电泳法5及荧光光谱法6等。但电化学分析法、生物发光法、毛细管区带电泳法和高效液相色谱法存在仪器昂贵、操作繁琐等缺点，而ATP检测试剂盒价格较高，试剂保存条件苛刻，不利于反复使用。虽然检测ATP的方法在不断改进，但灵敏度和选

3、择性仍然难以满足实际需要。荧光光谱法具有操作简便、灵敏度高、选择性好等特点，作为荧光探针的有小分子7、聚合物8及量子点等9。水溶性荧光共轭聚合物作为一类新型荧光探针具有摩尔吸光系数大、荧光量子产率高等优点，还具有“分子导线”的功能，能够实现荧光信号的放大，常用于生物大分子和生物小分子的检测等10～13。本实验采用的水溶性阳离子荧光共轭聚合物(Ω·cm)。0.5mol/LTrisHCl缓冲液。2.2实验方法荧光光谱的激发波长为395nm，发射波长为521nm，激发和发射光谱宽度带为10.0nm。实验考察了缓冲溶液、pH值、离子强度、干扰离子等对ATP猝灭聚

4、合物荧光光谱的影响。3结果与讨论3.1ATP对gCl2;12倍的La(NO3)3、Al(NO3)3,测定干扰在5%以内。小牛胸腺DNA、牛血清白蛋白(BSA)和腺嘌啉的干扰严重。3.5样品中ATP含量的测定取2片三磷酸腺苷二钠药片(每片含量20mg)，加入三氯乙酸0.30g，过滤，用超纯水定容至100mL，再逐级稀释至测定ATP的线性范围之内。新鲜鲫鱼购于当地市场，去除鱼鳞、鱼皮和鱼刺，用表1干扰物质的测定error(%)LAlanine5.0×10-4-3.5NH4Cl5.0×10-4+3.9LGlutamine5.0×10-4-1.7NaNO35.

5、0×10-4+1.1LMethionine2.5×10-4-3.1CH3COONa2.5×10-4+2.5LLeucine5.0×10-4-2.4KF5.0×10-4-1.5LTryptophane4.0×10-4-3.8NaBr4.0×10-4-3.0LThreonine5.0×10-4-1.5NaI4.0×10-5-4.6LIsoleucine2.5×10-4-4.3Na2CO32.0×10-4-4.2LHistidine5.0×10-4+2.5K2SO41.5×10-4-4.5Phenylalanine5.0×10-5-4.0MgCl21

6、.5×10-5+2.0CH3CH2OH5.0×10-4+1.5Zn(NO3)21.0×10-5+4.5C12H22O112.0×10-4+3.9La(NO3)35.0×10-6+3.5C6H12O65.0×10-4+1.9Al(NO3)35.0×10-6+3.8NaH2PO42.5×10-4-2.6Trisodiumcitrate1.0×10-5-4.5Na2HPO41.25×10-4-2.5牛血清白蛋白BSA1.0×10-7-1.5Na3PO45.0×10-5-2.0腺嘌呤Adenine2.0×10-8-2.5小牛胸腺DNA4.8×10-8-2.2高速组

7、织捣碎机捣碎。根据文献17处理方法提取ATP，准确称取1.0g已捣碎鲜鱼肉样品，加10倍体积(15mL)的4mol/LHClO4，漩涡混匀器混匀1min，冰浴1min，重复7次后，以6000r/min离心30min，取上清液2.0mL，加入1.8mL4mol/LKOH中和，再以3500r/min离心5min，取所得混合溶液稀释到测定ATP的线性范围之内。以上测定均以0.05mol/LTrisHCl(pH=7.4)控制溶液的pH值，ATP固体标样均在样品制备处理前加入。测定结果见表2，取得满意的回收率。表2药片及鱼肉中ATP含量的测定3.6作用机理探讨由于

8、,SinghSP.Electroanalysis,2007,19(