杜仲含药血清诱导骨髓间充质干细胞定向分化的实验研究

《杜仲含药血清诱导骨髓间充质干细胞定向分化的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、杜仲含药血清诱导骨髓间充质干细胞定向分化的实验研究作者：曾建春，樊粤光　刘建仁，曾意荣，李显彭，易春智【摘要】目的研究补肾中药杜仲含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及定向分化的影响。方法将第4代MSCs以5×106接种于9块96孔板，3组，每组8孔;2块6孔板，每板3孔，2d后换液，加入诱导液。分为空白组、地塞米松组、杜仲组。空白组加入含10%胎牛血清(FBS)的L-DMEM培养基继续培养，地塞米松组在基础培养基加入诱导剂(含β甘油磷酸钠10mmol/L，地塞米松0.1μmol/L，维生素C50mg/L)，杜仲组为含

2、10%杜仲含药血清的L-DMEM培养基。分别自加诱导液第1天起，采用MTT法测量96孔板细胞数，每天1块板;在第10天取出1块6孔板做ALP染色;第20天做6孔板茜素红染色。结果杜仲含药血清组OD值呈现出明显的上升趋势，而空白组和地塞米松组无明显上升趋势;第10天杜仲组及地塞米松组ALP染色阳性，第13天起可见白色钙结节，第20天茜素红染色阳性。结论杜仲含药血清能促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化，并刺激细胞增殖。【关键词】杜仲;骨髓间充质干细胞;成骨细胞　　Abstract：ObjectiveTostudythegenera

3、tionanddirectionaldifferentiationofBMSCsinducedbyDuzhong(eumiabark)illiliter,alltheholesedblankgroup,DXMgroupandDuzhong(eumiabark)group,eachgrouphadEightholesorthreeholes,tediumandaddedneedium.ThemediumofDXMgroupcontained10mmol/Lβ-sodiumglycerophosphate,0.1μmol/LDXM

4、,50mg/LvitaminC,thatofDuzhong(eumiabark)groupcontained10%bloodserumcontainingDuzhong(eumiabark).Measuredcellnumberof96-holeplatesfromtheseconddaytotheEIghthday,oneofthe6-holesplatesiabark)grouproseobviously,blankgroupandDXMgrouphadnoobviousascensus;onthetenthdayDXMg

5、roupandDuzhong(eumiabark)groupasculine;noduscouldbeseenontheundersurfaceoftheholes13dayslater,containingDuzhong(eumiabark)caninduceBMSCsdifferentiatetoosteoblastandstimulategroiabark);MSCs;osteoblast　　间充质干细胞(MSCs)是一种多潜能成体干细胞，主要存在于骨髓，还存在于胚胎时期间充质来源的骨外组织，如皮肤成纤维细胞、脂肪干细胞

6、、骨骼肌的卫星细胞和血管内皮细胞等。骨髓MSCs(BMSCs)是骨髓基质的组成成分，体外分离培养后，在一定的诱导条件下，具有向成骨细胞、软骨细胞、神经细胞、脂肪细胞、心肌细胞等多向分化的能力。在骨组织工程的种子细胞来源主要有成骨细胞和BMSCs等。成骨细胞虽然具有良好成骨活性，但来源有限，大量分离获取困难，体外大量扩增的潜力不足，难以满足骨组织工程临床应用的需要;BMSCs不仅具有良好的成骨细胞分化潜能和高成骨活性，而且具有强大的增殖潜能，来源方便，可以满足自体组织工程。中医认为，肾主骨，生髓。本实验拟研究补肾中药杜仲含药血清

7、对BMSCs增殖及定向分化的影响。　　1材料与仪器　　1.1动物SPFSD大鼠50只，体重150～200g，雌雄不限，由广州中医药大学实验中心提供。　　1.2试剂L-DMEM培养基、南美洲胎牛血清(FBS、海克隆)，β甘油磷酸钠、地塞米松、维生素C、茜素红、MTT(广州威佳)，DMSO(sigma)，杜仲(产地云南)，碱性磷酸酶染液、碱性磷酸酶试剂盒(南京建成生物有限公司)，0.25%胰酶(GIBCO公司)。　　1.3器材75cm2培养瓶、96孔板、6孔板(Coning)，酶标仪(Thermo)，CO2培养箱(Heraeus)

8、，注射器针头滤器，0.22μm滤膜(MILLIpore)，SIGMA-3K15离心机(sigma)。　　2方法　　2.1杜仲含药血清的制备取杜仲药材粗粉150g，加70%乙醇10倍量，加热回流两次，1h/次，过滤，合并滤液，滤液减压浓缩至300ml，室温冷却，4℃冰箱保存备用