妍婷颗粒对lps诱导小鼠脾细胞产生il

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1、妍婷颗粒对LPS诱导小鼠脾细胞产生IL【摘要】　　目的研究中药复方妍婷颗粒对脂多糖（LPS）诱导小鼠脾细胞产生白介素-1β（IL-1β）的影响，初步探讨妍婷颗粒对慢性盆腔炎免疫调节的内在机制。方法对经LPS诱导的小鼠脾细胞给予不同浓度妍婷颗粒含药血清进行干预，用ELISA法检测上清液中IL-1β含量，用RT-PCR法检测细胞中IL-1βmRNA的表达。结果①正常小鼠脾细胞合成和分泌少量IL-1β，经LPS诱导后IL-1β分泌量明显升高（P<0.01），IL-1βmRNA表达增强。②不同浓度妍婷颗粒干预呈剂量依赖方式降低LPS诱导的小鼠脾细胞IL-1β

2、的分泌量与表达（P<0.01）。结论妍婷颗粒具有抑制LPS刺激小鼠脾细胞产生IL-1β的作用，据此推测妍婷颗粒抗炎、免疫调节作用机理可能与其抑制脂多糖介导的IL-1β释放有关。【关键词】妍婷颗粒脂多糖小鼠脾细胞白介素-1β　　妍婷颗粒方为导师侯丽辉教授多年临床经验与中医理论相结合，总结出的治疗慢性盆腔炎的经验方，已在临床广泛应用多年，且疗效显著。慢性盆腔炎是妇科常见病、多发病，有缠绵不愈、易于复发的特点，近年其发病率呈上升趋势，因此对慢性盆腔炎的认识与研究日益广泛和深入。IL-1具有广泛的免疫调节、致热、介导炎症等作用，是慢性盆腔炎发生发展的一种重要

3、细胞因子。本研究观测妍婷颗粒对LPS诱导小鼠脾细胞产生IL-1β的影响，从分子免疫学角度探讨妍婷颗粒治疗慢性盆腔炎的机理和有效性。　　1器材　　1.1仪器与试剂超净工作台（苏州净化），二氧化碳培养箱（SHEL·LAB），台式高速离心机(BECKMAN)，电热鼓风干燥箱（天津泰斯特），AB204型电子天平(Sartorius)，磁力加热搅拌器78-1（江苏金坛），双蒸水馏器(MILLI-Q)，752型分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司），PCR仪(Eppendorf),稳压稳流电泳仪（北京市六一仪器厂）。　　改良型RPMI-1640培养液(Hyclone)

4、，胎牛血清（杭州四季青），D-PBS（北京中山金桥），LPS(Sigma)，Trizol(Lnvitrogen),引物(Sangon),氯仿（天津市天大化学试剂厂），异丙醇（天津市恒兴化学试剂制造有限公司），琼脂糖(Solarbio)，PCR所需试剂购自Promega及TakaRa公司，ELISA试剂盒（北京北方生物技术研究所）。　　1.2动物6～8周龄昆明雌性小鼠，体重20～25g，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。　　1.3药物妍婷颗粒方组成：丹参、赤芍、元胡、三棱、莪术、红藤、败酱草、皂刺、川楝子。药物来源于黑龙江中医药大学附属第一医院制剂室，制成

5、中药颗粒剂，蒸馏水溶解，最后浓缩含生药浓度为1.75g/ml。　　2方法　　2.1含药血清的制备取体重20～25g的正常昆明雌性小鼠，按人鼠体重比换算后，以妍婷颗粒方灌胃（20ml/kg，约相当于成人用量的7倍），2次/d，连续3d，最后1次给药后2h，颈动脉取血，以2000r/min离心5min，分离血清，并于57℃灭活（30min），－20℃冻存备用［1］。　　2.2小鼠脾细胞的分离培养小鼠颈椎脱位处死，置75%乙醇中浸泡3～5min，仰卧位，无菌取脾脏，用D-PBS液冲洗，置于平皿中，移入超净工作台，再以滤过的D-PBS快速、充分洗涤后，置于烧杯上的

6、200目不锈钢网，将脾组织用眼科剪剪成小块，用注射器芯研磨脾，至脾呈白色絮状，D-PBS液冲洗过滤脾细胞，收集细胞悬液无菌离心管中，1500r/min离心10min，使细胞沉淀，弃上清，再以D-PBS液洗涤细胞2次，RPMI-1640培养液洗涤细胞1次(均以1500r/min离心10min)。以RPMI-1640培养液（含10%胎牛血清，含有青霉素、链霉素各100u/ml）悬浮细胞，0.4%台盼蓝染色显示活力，细胞存活数大于90%，调整细胞密度，按1×106/ml密度接种细胞，置37℃，5%CO2培养箱中培养。培养12h后加LPS及不同浓度妍婷颗粒进行干预

7、（LPS浓度为10μg／ml［2］；妍婷颗粒浓度分别为培养基的5%，10%，20%［1］）。　　2.3实验分组实验分组为正常组；LPS处理组（10μg／ml）；5%妍婷颗粒＋LPS处理组；10%妍婷颗粒＋LPS处理组；20%妍婷颗粒＋LPS处理组。　　2.4实验检测给予LPS及妍婷颗粒干预24h［3］后收集上清及细胞。　　2.4.1培养液上清中IL-1β含量测定收集上清液－20℃冰箱保存，按ELISA试剂盒说明进行检测。　　2.4.2RT-PCR法检测细胞中IL-1βmRNA的表达用Trizol提取细胞总RNA,测总RNA纯度和含量,逆转录成cDNA,IL

8、-1β的上游引物为:5＇-AGGCTCCGAGATGAACAA-3