血小板衍生微粒对脐血粒巨噬祖细胞的促增殖作用

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1、血小板衍生微粒对脐血粒巨噬祖细胞的促增殖作用作者：费菲，陈宝安，黄成垠，李翠萍，裴孝平，仲悦娇，高峰，高冲【摘要】本研究探讨血小板衍生微粒(PMP)对脐血粒巨噬祖细胞集落形成单位（CFU-GM）的促增殖作用。采用不同浓度的凝血酶激活血小板释放出PMP，采用流式细胞术检测PMP的释放量，确定凝血酶的最佳实验浓度。应用Ficoll分离脐血单个核细胞（MNC），在含有不同浓度PMP的甲基纤微素半固体培养基中培养7天，观察CFU-GM集落形成情况。结果表明：2.0、1.5、1.0和0.5U/ml凝血酶激活血小板后的PMP释放率分

2、别为：28.7%、47.7%、50.1%和43.9%；CFU-GM集落产率与PMP呈剂量依赖关系，PMP为10、50、100μg/ml时的CFU-GM集落产率（个/2×105MNC）分别为：119.8±32.2、142.8±45.2、180.8±85.1。50、100μg/mlPMP组的集落产率与空白对照组（103.0±24.8）相比，P值均<0.05；而10μg/mlPMP组的集落产率略高于空白对照组，但P值>0.05。结论：用1.0U/ml的凝血酶激活血小板释放的PMP较为均一，而且释放量最大。PMP可促

3、进人脐血粒巨噬祖细胞的增殖。【关键词】血小板衍生微粒　　AbstractThisstudyedtoinvestigatetheeffectofplatelet-derivedmicroparticles(PMP)onstimulatingtheproliferationofgranulocyte-macrophageprogenitors(CFU-GM)fromumbilicalcordblood.DifferentconcentrationsofthrombinetrybintoproducePMP.Umbilical

4、cordbloodmononuclearcells(MNC)healthydonorsandtheMNCethylcellulosecontainingdifferentconcentrationofPMPandcoloniesicroscopeafter7days.Theresultsholthrombinationindose-dependentmanner.Thenumberofcoloniesper2×105MNCsingroupsofPMPatdifferentconcentrations(10，50and10

5、0μg/ml)berofcoloniesinthegroupsofPMPat100μg/mland50μg/mlberofcoloniesper2×105MNCinthegroupofPMP(10μg/ml)lthrombincangetthebestreleaseefficiencyofPMPandPMPcanenhancetheproliferationofgranulocyte-macrophageprogenitorcellsofumbilicalcordblood　　Keyicroparticles;cordb

6、lood;granulocyte-macrophageprogenitorcell　　血小板衍生微粒（platelet-derivedmicroparticles，PMP）是血小板激活后产生的直径为0.1-1.0μm的小囊泡颗粒，含有多种特异性膜糖蛋白和生物学活性的受体，可通过与靶细胞的相互作用启动靶细胞的生物学效应。研究表明，PMP可影响人类造血干细胞的多种功能：PMP可通过转移CD41抗原增强骨髓来源的造血干细胞对胶原蛋白的黏附能力；通过其表面CD40配体来增强骨髓来源的造血干细胞的生存能力；促进骨髓移植后免疫系统和

7、造血功能的恢复等［1］。本实验将PMP与人脐血造血干细胞共同孵育，以观察PMP对脐血粒巨噬祖细胞集落生长的影响。　　材料和方法　　样品来源　　10份脐血样品由南京大学医学院附属鼓楼医院产科提供。选择健康足月妊娠的产妇，胎儿娩出后立即结扎脐带，消毒后穿刺脐静脉，通过重力作用将脐血收集于200ml抗凝的采血袋中；采血量为80-100ml，4℃保存，8小时内分离单个核细胞（mononuclearcells，MNC）；血小板悬液由江苏省血液中心成份科提供，均为血细胞分离机采集的健康供血者的血小板。　　试剂与仪器　　重组人粒巨噬细

8、胞集落刺激因子(rhGM-CSF)购自厦门特保生物工程股份有限公司；白介素－3(IL-3)购自晶美公司；甲基纤维素为Sigma公司产品；IMDM为Gibco公司产品；淋巴细胞分离液（Ficoll，1.077）购自上海恒信公司；流式细胞仪为BectonDickinson公司产品；标记抗体CD61-FITC为Immuno