仔猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

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1、仔猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验程子兵1　董春霞2石国界3沙里塔那4马长丽1（1.塔城地区动物疾控与诊断中心　新疆塔城　834700；2.重庆市武隆县畜牧兽医局重庆市武隆县408500；3.塔城市畜牧兽医工作站新疆塔城834700；4.额敏县兽医工作站新疆额敏县834600）摘要:对塔城地区一农户饲养猪群中仔猪发生的临床症状以水肿病、白痢、黄痢为特征的病例进行了样品采集，后经麦康凯、伊红美蓝分离培养，糖发酵生化试验、动物试验等结果显示均为大肠杆菌，同时通过药敏试验筛选出敏感抗生素。关键词：仔猪；大肠杆菌；分离鉴定；药敏试验Abstract：Specimenswithdropsyanddy

2、senteryclinicalsymptomswereisolatedfromonehouseholdraisespiggroupinTachengarea.Bybacteriaculture,biochemicaltestandanimaltest,theresultsindicatethebacteriumispathogenicEscherichiaColi.Meanwhile,weascertainsensitiveantibioticstothisEcolibymedicinetest.Keywords:pig;EscherichiaColi;isolateindentify;med

3、icinetest仔猪大肠杆菌病是由大肠杆菌引起的肠道传染病，主要表现为仔猪白痢、黄痢和水肿病，其中黄痢多发生于1周内哺乳仔猪，病猪主要表现为排黄色糊状粪便；白痢多发于10～30日龄，病猪主要表现为排乳白色或灰白色腥臭糊状粪便；水肿病多发于断奶仔猪，主要有神经症状、胃壁、肠黏膜等组织水肿，四季均可发生，发病率和致死率高低不等，严重者同窝仔猪中发病率可达90％以上，致死率可达100％，幸存者则影响生长，甚至成为僵猪【l】。由于致病性大肠杆菌的血清型复杂，在不同猪场、不同季节、不同批次，不同年龄流行菌株均可能不相同，造成规模化猪场的防控困难，引起较大的经济损失[2]。笔者对塔城地区农户散养猪群中采

4、集的仔猪白痢、黄痢和仔猪水肿病的病料进行了细菌分离培养、鉴定及药敏试验。现将结果报告如下：1材料与方法1．1材料1.1.1采取农民散养户中临床症状较为典型的5份仔猪白痢、黄痢肛门拭子及仔猪水肿病的小肠黏膜2份。1.1.2培养剂、普通肉汤、血清琼脂平板由本实验室自行配制，麦康凯琼脂（MCK）、伊红美蓝琼脂（EMB）按参考文献[3]制备；三糖铁琼脂培养基、三糖铁琼脂斜面、MR、V—P、Idole、H2S、枸橼酸盐琼脂斜面、葡萄糖微量生化反应管、乳糖微量生化反应管、麦芽糖微量生化反应管、甘露醇微量生化反应管购自杭州微生物试剂有限公司，10种药敏试纸购自北京天坛生物技术有限公司。1.1.3实验动物12

5、只小白鼠。1.1.4药敏试验抗生素药敏纸片青霉素（PG）、丁胺卡那霉素（AKN）、头孢噻肟（CTX）、复合磺胺（SXT）、庆大霉素（GEN）、妥布霉（TOB）、苯唑青霉素（OXA）、头孢唑啉（CFZ）、头孢三嗪（CRO）、氟派酸（NOR）。1.2方法1.2.1细菌分离培养与镜检将待检样品接种于普通肉汤进行细菌培养，置37℃温箱培养12～16h观察结果；然后将培养物分别划线接种于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板进行细菌培养，37℃温箱培养20-24h后挑取平板上可疑菌落抹片革兰氏染色镜检。1.2.2生化试验生化鉴定挑取经纯培养的菌落分别接种于三糖铁琼脂斜面、MR、V—P、Idole、H2S、枸橼

6、酸盐琼脂斜面和葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇等发酵管，37℃培养24h。1.2.3致病性试验将分离菌的肉汤纯培养物对10只健康小白鼠分别腹腔注射0.4～0.5mL，另2只小白鼠腹腔注射0.4～0.5mL无菌肉汤培养液作为对照，24～48h死亡或发病者取肝脏抹片革兰氏染色镜检。1.2.4药敏试验采用药敏纸片扩散法[4],37℃培养18～24h后观察结果并测量抑菌圈。2结果2.1分离培养疑似培养物在麦康凯琼脂培养20h后均为红色菌落，在伊红美蓝琼脂上培养20h后为中心暗蓝黑色并有绿色金属闪光的菌落；革兰氏染色镜检均为革兰氏阴性中等大小杆菌。2.2生化反应从7份样品中分离的细菌经生化鉴定后，确定均为大

7、肠埃希氏菌，具体结果见表1：表1：大肠杆菌生化鉴定结果试验TSTH2SIdoleMRV-P麦芽糖枸橼酸盐甘露醇葡萄糖乳糖结果＋－＋＋－＋－＋＋＋2.3致病性结果将分离菌的肉汤纯培养物对12只健康小白鼠分别腹腔注射0.4～0.5mL，另2只小白鼠为对照，24～36h内死亡6只,48h后死亡2只,另2只发病,对照鼠不发病。取发病者肝脏抹片革兰氏染色镜检，结果均为革兰氏阴性中等大小杆菌。2.4药敏试验药