急性髓细胞性白血病细胞培养上清对cd4+ 和cd8+ t细胞增殖和凋亡的影响

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1、急性髓细胞性白血病细胞培养上清对CD4+和CD8+T细胞增殖和凋亡的影响作者：王兴兵，刘隽，贺艳丽，谷俊侠，郑金娥，姚军霞，杨晶，李小青，黄士昂【摘要】为了研究不同的急性髓细胞性白血病（AML）细胞株培养上清对CD4+和CD8+T细胞增殖以及凋亡的影响，探讨AML的免疫抑制的形成机制，将3种AML细胞株（HL-60、NB4和U937）培养上清和普通培养液按不同比例混合，用于培养CFSE染色的淋巴细胞。抗CD3抗体和抗CD28抗体刺激3天后，标记7AAD和相应荧光抗体。利用流式细胞术检测不同T细胞亚群CFSE荧光强度和7AAD表达率的变化，分析其增殖和凋亡变化情况。结果表明：3种

2、AML细胞株中有2种（HL-60和NB4）培养上清可显著抑制CD4+T细胞和CD8+T细胞的增殖，并随浓度增加而增强。同样，HL-60和NB4细胞株培养上清亦可抑制刺激后的CD4+T细胞的凋亡，但对刺激后的CD8+T细胞的凋亡并无明显影响。相反，HL-60和NB4细胞株培养上清可显著增加增殖的CD8+T细胞的凋亡。结论：AML细胞株培养上清液对CD4+T细胞和CD8+T细胞增殖的抑制以及对增殖的CD8+T细胞凋亡的诱导作用，可能是AML患者免疫功能缺陷的机制之一。【关键词】急性髓细胞性白血病　　EffectsofAcuteMyeloidLeukemiaCellSupernata

3、ntontheProli-ferationandApoptosisofCD4+andCD8+TCellSubsets　　　AbstractTostudytheeffectsofsupernatantderivedfromacutemyeloidleukemia(AML)celllinesonproliferationandapoptosisofCD4+andCD8+Tcellsubsetsandtoinvestigatethemechanismbyimmunerecognition，lymphocytesulatedthreeAMLcelllines(HL-60，NB4，U93

4、7).Afterculture，cellsuspensionsetryandthEirproliferationandapoptosistilarly，theapoptosisofstimulatedCD4+TcellsulatedCD8+TcellsremainedunaffectedbysupernatantfromHL-60andNB4.Incontrary，theapoptosisofproliferativeCD8+TcellsAMLcelllinesinhibittheproliferationofCD4+andCD8+Tcellsandinducetheapopt

5、osisofproliferativeCD8+Tcells，thatmaybeoneofthemechanismsbymunityyeloidleukemia;CD4+Tcell;CD8+Tcell;cellproliferation;apoptosis　　急性髓细胞性白血病（AML）患者免疫功能的抑制是其发病率和死亡率增加的一个重要原因。研究显示，包括AML细胞在内的多种肿瘤细胞可通过分泌抑制性细胞因子影响T淋巴细胞的增殖和凋亡，进而发挥其免疫抑制功能［1-3］。但是，这些抑制性细胞因子对不同T细胞亚群功能的影响目前尚不清楚。CFSE是一种能自发不可逆地结合与细胞蛋白质上的活

6、体荧光染料。当细胞分裂时，CFSE可平均分配到2个子代细胞中，其荧光强度将是亲代细胞的一半，并且能够利用流式细胞仪进行检测（F1通道）和分析。如同时标记不同的荧光抗体，则可实现对1个增殖细胞群内不同细胞亚群的增殖研究［4］。本研究采用上述方法观察白血病细胞培养上清对CD4+和CD8+T细胞的增殖影响，同时利用7AAD检测不同T细胞亚群凋亡的变化情况，探讨AML免疫抑制的形成机制，以期为白血病的生物治疗提供可能的新思路。材料和方法　　细胞株及主要试剂　　AML细胞株HL-60和NB4分别由附属协和医院血液病研究所吴青博士和李新刚博士惠赠，U937细胞株为本研究室所有。RPMI16

7、40培养液、胎牛血清购自Gibco公司，抗CD3抗体和抗CD28抗体购自RD公司，CFSE染料购自MolecularProbes公司。藻红蛋白（PE）标记的CD4抗体和CD8抗体以及7AAD购自PharMingen公司。FACSCaliber流式细胞仪为美国BectonDickison公司产品。　　AML细胞株培养及上清收集　　于37℃、5%CO2孵箱中，以含10%FBS的RPMI1640培养液培养AML细胞（HL-60、NB4和U937，浓度均为2×105），24小时后收集培养上清，滤去杂