壳聚糖膜联合脂肪间充质干细胞促进创面愈合的实验分析

《壳聚糖膜联合脂肪间充质干细胞促进创面愈合的实验分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、-广州医科大学硕士学位论文主要符号表英文缩写英文全称中文全称ADSCsAdipose-DerivedMesenchymalStemCells脂肪间充质干细胞BMSCsBoneMarrowDerivedMesenchymalStemCells骨髓间充质干细胞CTTCellTransplantationTherapy细胞移植疗法CSChitosan壳聚糖CSDChitosanDressing壳聚糖膜CTChitin甲壳素FBSFetalCalfSerum胎牛血清GFPGreenFlourescentProtein绿色荧光蛋白HEHematoxylinAndEosin苏

2、木素-伊红ICsImmortalizedcells永生化细胞MSCMesenchymalStemCells间充质干细胞PBSPhosphateBufferedSaline磷酸缓冲液系统RWRefractoryWound难愈性创面RGRRelativeGrowthRate相对增殖度VEGFVascularEndothelialGrowthFactor血管内皮生长因子2----万方数据----中文摘要壳聚糖膜联合脂肪间充质干细胞促进创面愈合的实验研究研究生：张毛毛导师：胡葵葵教授中文摘要难愈性创面（RefractoryWound，RW）是指在期望的时间内不能正常愈合，

3、与创面所在部位和宿主本身疾病有关的一类创面，目前临床上发病率非常高。细胞移植疗法(CellTransplantationTherapy，CTT)不依赖于外科植皮手术，能够显著改善创面愈合质量。目前细胞移植疗法相关的基础与临床研究是国内外研究热点，且治疗所应用的种子细胞来源广泛，具有良好的应用前景。近年来随着材料科学的发展，选择一种与细胞移植疗法相适应的生物工程材料可以为难治性创面治疗提供不同的治疗策略。壳聚糖(Chitosan，CS)作为一种生物相容性极佳的可降解材料，对人体无毒副作用，且具有抗炎、抗氧化、止血、促进创面愈合、镇痛、抗感染等多种利于机体修复的生物学

4、特性，是一种非常适合应用于难愈性创面修复的生物工程材料。壳聚糖水凝胶(ChitosanHydrogels，CSH)目前已广泛应用于生物医药等领域，临床实验已取得一定成果，但其相关机制研究仍不甚明确，制约了其在皮肤创面愈合方面进一步的临床应用。本文旨在通过实验合成一种新型壳聚糖水凝胶，联合脂肪间充质干细胞（Adipose-derivedMesenchymalStemCells，ADSCs）共同应用于难愈性创面的治疗，研究壳聚糖水凝胶联合ADSCs对难愈性创面的疗效并探讨其部分生物学机制，为临床治疗难愈性创面提供一种新的治疗策略。目的：通过建立一种高效的ADSCs分离

5、培养体系，观察ADSCs的生物学特征并通过适宜培养方法实现ADSCs的大规模扩增，并对新型壳聚糖水凝胶的制备方法进行探索性研究，并系统性分析其成膜性、细胞毒性及表面结构，观察壳聚----万方数据----广州医科大学硕士学位论文糖水凝胶联合ADSCs对难愈性创面愈合的促进作用，并对其生物学机制进行深入探讨。方法：选用SPF级绿色荧光蛋白（GreenFlourescentProtein，GPF）转基因小鼠，取腹股沟处脂肪垫，胶原酶消化法获取ADSCs，流式分析细胞表面特异性标志物，并诱导细胞向成脂细胞、成骨细胞、成软骨细胞方向分化，观察ADSCs多向分化能力。制备成功

6、的壳聚糖膜后用扫描电镜检测其表面结构，同时制备壳聚糖膜的浸液，进行ADSCs细胞毒性检测。将制备成功的小鼠全层皮肤缺损模型为四组：A组：生理盐水组；B组：CSH组；C组：ADSCs组；D组：CSH+ADSCs组。术后每天观察创面有无感染、异常分泌物等情况，并隔天记录创面面积以计算创面愈合率。术后14d在取创面皮肤组织进行冰冻切片，观察创面皮肤组织中GFP阳性细胞存活情况，以评估ADSCs参与创面愈合情况，HE切片观察创面皮肤组织中肉芽组织增生和上皮化过程。同时行WesternBlot方法检测创面组织GFP、VEGP蛋白表达情况。结果：1.实现了ADSCs的成功分离

7、，其形态上呈纺锤形，具备典型的间充质干细胞（MesenchymalStemCells，MSCs）的形态学特征。流式检测结果显示ADSCs高表达间充质标记物CD10、CD13、CD166以及粘附因子CD29及CD54；低表达造血系细胞表面标记物CD34及血管内皮性抗原CD45。ADSCs成脂细胞诱导后，苏丹Ⅲ染色示细胞中心发现橘黄色小泡；ADSCs成骨细胞诱导后ALP碱性磷酸酶染色示细胞有黑色结节；ADSCs成软骨细胞诱导后阿辛蓝染色后细胞呈紫色。2.制备成功的CSH通体透亮，微呈黄色或无色，呈半流动凝胶状。制成后的CSD体积萎缩明显，并具有一定柔韧性和吸水性。5万

8、倍扫描电镜