庆阳地区肠杆菌科细菌碳青霉烯酶基因的检测研究

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1、庆阳地区肠杆菌科细菌碳青霉烯酶基因的检测研究贾晓燕张成显(庆阳市镇原县第一人民医院744500)【摘要】目的了解庆阳地区耐碳青霉烯类肠杆蘭科细菌的耐药情况和碳青霉烯酶耐药基因及其分布。方法收集2013年1月至12月各大医院头孢他啶、亚胺培南(IPM＞、美罗培南(MEM)或厄他培南(ETP)耐药(纸片扩散法)的肠杆菌科蘭株，并对其检验结果作回顾性分析。结果共收集到肠杆菌科细菌256株，其中耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌8株，占3.1%;采用改良Hodge试验确认阳性3株，占1.2%株。PCR检测显示1株耐碳青霉烯类抗生素的肺炎克雷伯菌blaNDM-1

2、阳性。结论庆阳地区产碳青霉烯酶不是肠杆蘭科细菌耐碳青霉烯类药物的关键因素，但是其编码基因位于可转移质粒进行传播会使得目前的耐药情况越来越严峻。【关键词】肠杆菌科细菌碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因PCR【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2014)18-0166-02碳青霉烯类抗生素是抗菌谱最广、抗菌活性最强的非典型β内酰胺类抗生素，是治疗多重耐药菌感染最主要的抗菌药物之一。尽管目前碳青霉烯类抗生素还是治疗多重耐药菌的一线用药，似是随着产碳青霉烯酶菌株的不断出现，将会是今后临床抗感染所面临的巨大

3、难题，木研究通过以甘肃地区耐碳青霉烯类的肠杆菌科细菌为对象，进行碳青霉烯酶基因的检测,希望为临床抗感染合理用药和防止耐药菌的不断扩散提供帮助。1材料与方法1.1一般资料菌株来源2013年1月至2013年12刃从庆阳各大医院不同病区分离的肠杆菌科细菌256株，分析其耐药情况。1.2一般方法1.2.1菌株鉴定及常规药敏试验(MIC值测定)按全自动微生物鉴定系统VITEK??32及配套试剂革兰阴性杆菌鉴定卡(GNI+)和药敏卡(GNI+AST)对株进行鉴定。常规药敏试验包括以下抗菌药物：氨苄西林(AM)、哌拉西林(PIP)、头孢唑啉(CZO)、头孢

4、呋辛酯(CXM)、头孢曲松(CRO)、头孢他啶(TAZ)、头孢吡肟(FEP)、氨曲南(AZT)、哌拉西林/三唑巴坦(TZP)等。1.2.2改良的Hodge试验参照CLSI标准进行，稀释十倍的0.5麦氏浊度单位大肠埃希菌ATCC25922菌液均匀涂布MH平板冲间贴上ETP(lOug)纸片，再用无菌接种环自纸片外缘向平板边缘划线接种待测菌株,35°C孵育16〜18h后观察结果,结果判断:厄他培南抑菌圈内出现待检菌矢状生长者为产碳青霉烯酶菌株。2结果2.1药敏试验8株耐碳青霉烯类抗菌药物的肠杆菌科细菌的7种抗菌药物的体外药敏检测结果(表2-1)表2

5、-18株耐碳青霉烯类抗生素肠杆菌科细菌的药敏结果注：R-耐药I-中介S-敏感2.2改良的Hodge试验8株耐亚胺培南、美罗培南或厄他培南的菌株进行产碳青霉烯酶的确认，结果阳性为3株，占1.2%。2.3基因检测对3株待测菌进行PCR扩增，PCR产物在1.2%琼脂糖凝胶中电泳，未得到blaKPC、blaSME、blaIMP、blaVIM目的基因条带。kpn3(肺炎克雷怕菌)1株细菌出现blaNDM-10的条带。3讨论碳青霉烯类抗生素是抗菌谱最广、抗菌活性最强的非典型β内酰胺类抗生素,因其对β内酰胺酶稳定以及毒性低等特点，已经成

6、为治疗多重耐药菌感染最主要的抗菌药物之一［1】。但随着碳青霉烯类药物的广泛使用，耐药株的出现也越来越多［5】。本研究采用改良的Hodge试验对8株耐亚胺培南、美罗培南或厄他培南的菌株进行产碳青霉烯酶的确认，其中3株为阳性，占37.5%,提示碳青霉烯酶的存在。同吋PCR检测显示1株耐碳青霉烯类抗生素的肺炎克雷怕菌blaNDM-1阳性。这说明在庆阳地区肠杆菌科细菌对碳青霉烯类的耐药机制中产碳青霉烯酶不是主要因素，但是携带blaNDM-1肺炎克雷扪菌的存在却不容忽视，对其进一步检测和研究有待以后实施［2】。肠杆菌科细菌在医院感染中占主要地位，尤其是

7、ICU和呼吸感染病房等，随着碳青霉烯类的广泛应用而形成的选择性压力将诱导细菌产生新的突变基因，尤其是碳青霉烯酶在全球范围内的广泛传播，造成了对碳青霉烯类、青霉素类、头孢菌素类和氨曲南在内的几乎所有B内酰胺类抗菌药物耐药［3】。对于这些经检测确认是产碳青霉烯酶的菌株，微生物实验室可以将实际测得的M1C值和PCR检测所得的具体基因型别报告给临床，为临床医生合理选择抗生素提供参考依据。参考文献［1］冯雅君，沈萍，杜小幸，等.产碳青霉烯酶KPC-2肺炎克雷伯菌局部流行［」］.浙江医学,2008,30(9):923-925,930.［2］倪语星，杨莉.

8、医院感染的分子流行病学研究方法及应用［j］.国外医学(微生物学分册),2003,26(6):R37R19.［3］李静.胡志东.产IMP—4型金属日内酰胺酶致肺炎克雷