实验细胞骨架的观察

《实验细胞骨架的观察》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、实验六细胞骨架的观察一、考马斯亮兰R250染色法【实验目的】掌握用考马斯亮蓝R250（CoomassieblueR250）染色法观察植物细胞骨架的方法。【实验原理】细胞骨架是指存在于真核细胞中的蛋白纤维网架体系。其概念具有狭义和广义之分：狭义的细胞骨架是指细胞质骨架包括微丝、微管和中间纤维；广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质。核骨架、核纤层与中间纤维在结构上相互连接，贯穿于细胞核和细胞质的网架体系。【实验原理】细胞骨架(Cytoskeleton)组成：主要包括微管、微丝和中间纤维以及

2、核骨架-核纤层体系。微管主要分布在核周围，呈放射状向四周扩散，微丝主要分布于细胞质膜的内侧，而中间纤维则分布在整个细胞中。细胞骨架作用：具有维持细胞形态结构和内部结构的有序性、参与细胞运动、物质运输、能量转换、信息传递和细胞分裂等重要功能。细胞骨架的研究方法：考马斯亮兰R250染色法、荧光素标记的鬼笔环肽染色法、间接免疫荧光法等。考马斯亮兰R250染色法的原理：考马斯亮蓝R250可以对各种蛋白质进行染色。细胞骨架有一个特性，即用非离子去垢剂（如TritonX-100）处理时，可以保持非溶解状态。当用这类试剂处理细

3、胞时，细胞内其它可溶性的物质和膜成分都被抽提出来，只留下细胞骨架。考马斯亮蓝R250虽不能对微丝进行特异性染色，但当其它蛋白成分被抽提后，就能清晰地显示微丝束的形态。TritonX-100SDS[实验器材、材料和试剂]光学显微镜；烧杯、吸管、镊子、玻片染色缸、载玻片、盖玻片；新鲜洋葱;6mM磷酸盐缓冲液（pH6.8）、M缓冲液、1%TritonX-100、0.2%考马斯亮蓝R250、3%戊二醛。3%戊二醛用PBS配制[实验步骤]1、撕取洋葱鳞茎内表皮(约1平方厘米)置于3~5mlpH6.8磷酸缓冲液中待其下沉(烧

4、杯1)；对照无PBS处理；2、用3~5ml1%TritonX-100处理20min(烧杯2)；对照无1%TritonX-100的M缓冲液处理20min;3、吸去TritonX-100，用M缓冲液3~5ml洗2次，每次5min(烧杯3)；对照无M缓冲液处理;4、3~5ml3%戊二醛固定20min(烧杯4)；5、pH6.8磷酸缓冲液3~5ml洗2次，每次5min，滤纸吸去残液(烧杯1)；6、3~5ml0.2%考马斯亮蓝R250染色15和30分钟，然后用蒸馏水小心冲洗1～2次(烧杯5)；做染色时间的影响；7、将表皮铺放

5、在载玻片上，加盖玻片，在高倍显微镜或者油镜下进行观察。细胞骨架洋葱表皮细胞骨架