高效液相色谱hplc简介

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1、高效液相色谱（HPLC）简介盛卫坚目录1,液相色谱分析法的发展2,高效液相色谱的特点3,高效液相色谱仪简介4,液相色谱法介绍5,分析方法的选择6,实际分析操作过程1、液相色谱分析法的发展20世纪初：俄国植物学家茨维特提出经典液相色谱法。经典液相色谱法包括柱色谱、薄层色谱、纸色谱。20世纪60年代末：随着色谱理论的发展、高效细微固定相的开发、高压恒流泵及高灵敏度检测器的应用，高效液相色谱法得到了突破性的发展。2.1HPLC的特点（一）项目高效液相色谱法经典液相色谱法色谱柱：柱长/cm柱内径/mm10～252～1010～20010～50固定相粒径/μm5～50

2、75～600色谱柱柱效（理论塔板数）2×103～5×1042～50柱压降/MPa5～150.001～0.3进样量/g10-6～10-20.1～10分析时间/h0.05～1.01～202HPLC的特点２.2HPLC的特点（二）项目高效液相色谱法气相色谱法进样方式样品制成溶液样品需气化或裂解流动相溶液惰性气体分离原理吸附、分配、筛析、亲和等吸附和分配检测器UVD、PDAD、RID等TCD、FID、ECD等应用范围低、中、高沸点有机化合物离子型无机化合物热不稳定化合物生物活性分子低沸点有机化合物永久性气体3、液相色谱仪简介贮液罐A高压输液泵A阻尼器A贮液罐B高压

3、输液泵B阻尼器B初步混合器压力传感器混合器进样器色谱柱检测器谱图输出3.1高效液相色谱仪构造3.2高压输液泵简介高压输液泵的一般要求：泵体材料耐酸、耐碱、耐化学腐蚀；耐压40～50MPa，能连续工作；输出流量稳定，重复性佳；输出流量范围宽，对填充柱：0.1～100mL／min。注射型泵------输出精确，无脉动，需更换溶剂而中断工作。◆恒流泵往复型泵------造价低廉，溶剂更换方便，但存在脉动。◆恒压泵--------压力恒定，但流量不恒定；3.3阻尼器介绍阻尼器----消除、减轻往复式柱塞泵输出的压力脉动。3.4.1检测器简介（一）◆紫外吸收检测器（

4、UVD）原理：用特定波长的紫外光照射样品池，通过检测透光率的变化来测定样品浓度的检测器。它具有波长固定，波长可变和光二极管阵列三种类型。特点：选择性检测器、对流量和温度敏感性低、灵敏度较高（10-9g）。◆折光指数检测器（RID）原理：监测参比池和测量池中溶液的折射率之差来测量试样浓度的检测器。特点：通用性检测器，温变化要保持在±0.001℃、灵敏度低（10-6g）。3.4.2检测器简介（二）◆电导检测器（ECD）原理：监测溶液的电导率变化的检测器。特点：选择性检测器、测量时要求恒温、对流动相的组成变化有明显响应、灵敏度低（10-3g）。适用于离子型化合物

5、。◆荧光检测器（FLD）原理：某些溶质在紫外光激发后能发射可见光（荧光）的性质检测。特点：选择性检测器、灵敏度高（10-12g）、对流量和温度敏感性低。3.4.3检测器简介（三）◆蒸发光散射检测器（ELSD）原理：通过检测光散射程度而测定溶质浓度的检测器。色谱柱后流出物在通向检测器途中，被高速载气（氮气）喷成雾状液滴，再进入蒸发漂移管中，流动相不断蒸发，含溶质的雾状液滴形成不挥发的微小颗粒，被载气载带通过检测器。在检测器中，光被散射的程度取决于溶质颗粒的大小与数量。特点：消除了溶剂的干扰，不受温度变化影响，灵敏度高，是通用型检测器。4、色谱分析法简介液固色

6、谱------以固体吸附剂为固定相，依靠吸附－脱附平衡实现分离，常用的固定相有碳酸钙、硅胶、三氧化二铝、氧化镁、活性炭等。特点：有时会发生不可逆吸附，应用受到限制。液液色谱------以吸附载带在惰性固相载体上的极性或非极性固定液为固定相，依靠溶解－解吸平衡实现分离。特点：固定液可选择余地大，重现性、分离效果好。4.1.1色谱分析法介绍（一）4.1.2色谱法简介（二）体积排阻色谱法--------以多孔性凝胶为固定相，借助多孔性凝胶孔径的大小，使样品中的大分子不能进入凝胶孔洞而完全被排阻，只能沿凝胶粒子之间的空隙通过色谱柱，而首先被洗脱出来。被分析样品可按

7、分子的相对大小分别先后流出。特点：洗脱时间短，但不适于分离组成复杂的混合物。适用范围：分子量差别较大的样品。离子对色谱法--------分析离子化的强极性化合物。亲和色谱法等等4.1.3色谱法简介（三）◆键合相色谱法简介键合相色谱-------是由液液色谱发展起来的，在高效液相色谱法中占有极其重要的地位。将有机官能团通过化学反应共价键合到硅胶（载体）表面的游离羟基上，生成化学键合固定相，解决固定液的流失问题,是目前用的最多的一种色谱分析法。根据键合固定相与流动相相对极性的强弱，分为正相键合相色谱法与反相键合相色谱法。正相键合相色谱------固定相极性强；

8、反相键合相色谱------固定相极性弱。４.2.1色谱柱简介（一）