产碱杆菌czcd基因的克隆表达以及功能的初步分析

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1、兰弼大学鼷+辜盈论文产碱释蘩CzcD摹闲豹竞隆，表运浚及臻藐鹃秘步研究摘要CzcD基因位于产碱杆菌叫lcaligeneseutrophus)CH34的质粒pML030上，研究表明：该基因编码的蛋自质是AlcaligeneseutrophusCH34中CZC离予泵出系统中的一员，该系统主要通过CzcA，B，C成员完成对重金属的泵出、转运等过程，从而增强菌株对某些重金属的抗性。而CzcD对CzcA，B，C的表达有诱导作熙。本论文以产碱杆菌菌株CH34的质粒为模板，经PCR扩增褥到CzcD基因；并转化大肠杆菌BL21菌株

2、，研究其诱导表达情况。同时，为了检测蛋白质CzcD是否具有一定的重金属抗性，通过设计相应的阴阳性对照，将各种菌株在不同浓度的重金属培养基中培养，检测OD600值以观察各细菌的生长状况，发现在CzcD蛋白质的作用下，转入CzcD基因的工程菌较野生型菌株的生长量大，具有相对较强的熏金属抗性。本文为研究细菌对重金属的抗性机理，以及构建具有重金属抗性的工程菌来高效净仡环境中重金属的污染提供～定的理论基础。本论文研究得到以下结果：1．PCR扩增得到了CzcD基因，将其转化大肠杆菌BL21菌株，得到PETCZCD菌株。当该菌液

3、的OD600值达到1．0，培养瀣度为37。C时，在终浓度为1．0mM的IPTG诱导下，蛋白有较高的表达量。2．得到不同类型的阴，阳性对照菌株：对产碱杆菌CH34的野生菌做质粒消除实验得到菌株ACH34。PETCZCD菌株提取质粒转纯到ACH34中褥到菌株JH。pET-28(a)空载体转化大肠杆菌BL21得到菌株PETBL21。3．CzcD蛋白质能赋予宿主菌一定的重金属钻，锌，镉的抗性。关键词AlcaligeneseutrophusCH34，CzcD基因，重金属抗性，质粒消除，转化兰燃太学硬圭毕遂论文产藏耔藤酝D差斑

4、酶克陵，表达瑶及蘑麓戆初步辑究Abstract刖糙CzcDgenewaslocatedintheplasmidpMOL30ofAlcaligeneseutrophusC秘34。TheresearchhaverevealedthattheproteinCzeDiSoneoftheCZCironeffiuxsystemintheAlcaligeneseutrophusCH34anditisallimportantinducertotheexpressionofCzcA，B，C．TheCZCsystemcanpumpan

5、dtransportsomeheavymetalironbYproteinCzcA,B。C。Inthispaper,CzcDgenewasclonedandtheproductwastransformedintoEscherichiacoliBL21tOstudytheexpressionofCzcDinthehost．WhetherornottheCzeDhadtheheavymetalresistanceWasalsobeenstudiedinthispaper。Differentpositiveandnega

6、tivecontrolsweregained。Allthestrainsgrewinthemediumwithdifferentheavymetaltoseethegrowthdifferencebetweenthem．Tllisresearchsuppliessomerationaletothestudyofthebacteriumheavymetalresistanceandtheconstructionofthenewengineeringstrainswhichhavetheabilitytocleanth

7、eheavymetalpollutionintheenvironmem．硼1eresultswereasfollows：1．CzcDgeneWasclonedandtransformedintoEscheriehiacoilBL21togainthestrainPETCZCD．AndabundanceofproteinCzcDwasgottenafterPETeZCDWascultivatedintheLBfor4hoursat37℃whentheOD600Wasat1．0，adding1．0raM球誓(爻2．Di

8、fferentpositiveandnegativecontrolsweregained．The△CH34whichwasobtainedbyplasmidcuringofwildtypeAlcaligeneseutrophusCH34。ThentheplamidofPE_rCZCDWastransformedinto△CH34andthestrainwas