抗猪圆环病毒2型卵黄抗体的研制及效果的分析

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1、抗猪圆环病毒2型卵黄抗体的研制及效果的研究摘要本研究制备了抗猪圆环病毒2型特异性卵黄抗体，研究了抗体体外和小鼠体内抑制病毒增殖的能力。主要研究内容如下：1．抗猪圆环病毒2型特异性卵黄抗体的制备选取32只22周龄健康产蛋鸡，随机分为4组，每组8只，每只为一个重复。对照组注射生理盐水，试验组1：用灭活的PCV2与弗氏佐剂乳化后逐次增加剂量免疫蛋鸡；试验组2：用灭活的PCV2与弗氏佐剂乳化后保持相同剂量免疫蛋鸡；试验组3：用PCV2免疫蛋鸡；共免疫五次。用ELISA和胶体金两种方法检测蛋鸡血清抗体和卵黄抗体水平，水稀释．硫酸铵一次盐析．二次

2、盐析．透析．浓缩提取IgY，BCA法检测每一次提取后所获得的蛋白浓度，SDS．PAGE检测各步骤提取后IgY纯度。结果表明：各试验组蛋鸡的血清抗体水平始终高于卵黄抗体水平，试验组l所获得的抗体效价最高，最高效价可达到1：640，并且持续时间较长，持续时间可达8周以上；通过水稀释．硫酸铵一次盐析．二次盐析．透析．浓缩各步骤提取，每10nll卵黄液最终可获得卵黄抗体51．67mg；经SDS—PAGE检测，杂带较少，抗体纯度较．__；-局o2．抗猪圆环病毒卵黄抗体的体内外中和试验IgY的最大无毒作用浓度的研究：在96孔细胞培养板中，将卵黄抗

3、体倍比稀释成不同浓度，加入长成良好的细胞，用倒置显微镜观察细胞病变情况；IgY体外中和试验：将卵黄抗体倍比稀释成不同浓度，与200TCID50的PCV2体外中和1h后加入长成良好的细胞，培养48h后收集细胞，提取病毒DNA，通过实时荧光定量PCR测定病毒的拷贝数；IgY体内中和试验：选取30只8周龄SPF级BALB／c小鼠，分为3组，阴性对照组：腹腔注射生理盐水，0．5ml／只；试验组：IgY与PCV2(107TCID5dml)中和一个小时后腹腔注射，O．5ml／只；阳性对照组：腹腔注射PCV2(107TCID5dml)，0．5ml／

4、只，于7d、14d采集血液和组织，检测小鼠体内病毒复制情况和血清抗体水平。IgY细胞毒性试验结果表明：IgY不引起细胞产生CPE，但会促进细胞的生长，产生细胞堆积，并且随着IgY浓度的降低，堆积现象逐渐减少，当IgY浓度为0．9mg／ml时，堆积现象消失；IgY体外中和试验表明：当IgY的浓度为225肛g／ml时，阳性对照组和试验组细胞中PCV2的拷贝数存在显著差异，处华中农业人学201l届硕上研究生学位论文理组IgY抑制了病毒的复制，并且随着IgY浓度的增加，病毒的拷贝数逐渐降低；IgY体内中和试验结果表明：当IgV浓度为100mg

5、／ml时，IgY能够明显抑制小鼠组织中PCV2的增殖。关键词：猪圆环病毒；卵黄抗体；BALB／e小鼠；体外中和试验；体内中和试验Ⅱ抗猪圆环病毒2型卵黄抗体的研制及效果的研究Abs仃actInthisstudy，specificIgYagainstporcinecircovirustype2wasprepared，andtheeffectsofantibodieswhichinhibitsvirusweredinvestigatedinvitroandinmiceconditions．，nlemaincontentsareasfollo

6、ws：1．PreparationofspecificeggyolkantibodyagainstPCV232healthylayinghensof22weeksoldweredividedinto4groups，wiⅡl8replicationspergroup．Controlgroupinjected、7l，itllsaline；Testgroup1：inactivatedPCV2emulsifiedwithFreund’Sadjuvantwithincreasingdose；Testgroup2：inactivatedPCV2em

7、ulsified谢mFreund'sadjuvantwithmaintainthesamedose；Testgroup3：inactivatedPCV2，atotalimmunizationforfivetimes．TheantibodylevelinserumandeggyolkWasdetectedbybothELISAandimmunitycolloidgold；IgYWasisolatedfromeggyolkbywaterdilution,salting—out，thesecondsalting—out,dialysisan

8、dconcentration；BCAmethodassaytheproteinconcentrationofeachextraction；ThepurityofeachextractionstepWasdetectedb