鸭群中禽白血病病毒的核酸检测分析

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1、符号及缩略词‘～警卿英文缩写英文全称中文名称rpmREVrotationperminuteReticuloendotheliosisvirus转/分钟禽网状内皮增生病病毒RSVsRouss缸comavirussecond劳斯肉瘤病毒秒SDSSodiumdodecylsulphate十二炕基硫酸铀SPFSpecificpa也ogen企ee无特定病原μgmIcrogram微克μLmicroliter微升目录中文摘要．IAbstract．II1弓l言．11．1禽白血病的研究概述．．11．2病原学21．2．1分类。21．2．2病毒形态一21．2．3化学组成31．

2、2．4基因组结构与功能31．2．5病毒复制51．2．6毒株分类61．2．7内源性白血病病毒71．3流行病学。81．3．1发病率81．3．2传播方式81．4病理生物学。91．4．1临床症状91．4．2病理变化．91．5禽白血病的检测和诊断lO1．5．1病原分离和鉴定．．111．5．2聚合酶链式反应(PCR)．111．5．3血清学检测．．121．5．4鉴别诊断。121．6致肿瘤机制131．7预防和控制141．7．1净化原代种鸡场141．7．2保持鸡群对ALV的高度洁净状态141．7．3政府部门强化种鸡群的监控151．8本研究的背景、目的及意义152材料与方法

3、。162．1鸭群中禽白血病病毒p27基因的核酸检测162．1。1材料162．1．1．1鸭组织样品．162．1．1．2菌种和载体．162．1．1．3主要试剂．162．1．1．4主要仪器“．162．1．1．5常规试剂及配制．162．1．2方法182．1．2．1引物设计与合成．182．1．2．2组织DNA的提取．182．1．2．3目的片段的PCR扩增和纯化回收182．1．2．4目的片段与载体的连接192．1．2．5DH5a大肠杆菌感受态细胞的制备．．202．1．2．6连接产物的转化202．1．2．7质粒DNA的提取．．202．1．2．8重组质粒酶切鉴定。212

4、．1．2．9阳性克隆序列的测定222．2禽白血病病毒env基因的PCR扩增222．2．1材料222．2．2方法．：．222．2．2．1引物设计与合成．222．2．2．3目的片段与载体的连接．222．2．2．4DH5a大肠杆菌感受态细胞的制各一222．2．2．5连接产物的转化．222．2．2．6质粒DNA的提取。222．2．2．7重组质粒酶切鉴定．222．2．2．8阳性克隆序列的测定．222．3ALV-B单因子血清的制备222．3．1材料222．3．2方法232．3．2．1设计引物232．3．2．2四段基因的PCR扩增和纯化回收232．3．2-3目的片段与

5、载体的连接．232．3．2．4Rosetta(DE3)PLys感受态细胞的制备232．3．2．5连接产物的转化．242．3．2．6重组质粒DNA的提取。242．3．2．7重组质粒的PCR鉴定。242．3．2．8重组质粒的诱导表达242．3．2．9表达蛋白的SDS．PAGE检测242．3．2．10重组蛋白的大量表达和纯化．．262．3．2．11免疫疫苗的制备及免疫．262．4四种单因子血清分别与A、B和J型ALV分别作IFA区分鉴定272．4．1材料272．4．2方法272．4．2．1病毒感染细胞DNA的提取及ELISA检测272．4．2．2单因子血清对已

6、知删诅、ALV-B与ALV-J的间接免疫荧光(IFA)鉴定293结果与分析。303．1鸭群中禽白血病病毒p27基因的核酸检测303．1．1p27基因的PCR扩增结果。303．1．2ALVP27基因在不同地区鸭群中的携带率分析303．1．3p27基因的测序结果313．2env基因的PCR扩增．323．2．1env基因的扩增结果323．2．2env基因的序列比对结333．2．3cnv基因与ALV参考株cnv基因的同源性分析结果．．353．3ALV-B单因子血清与A、B和J型ALV分别作IFA区分鉴定353．3．1四段基因的PCR扩增结果．353．3．2四段基

7、因重组质粒的PCR鉴定363．3．3SDS．PAGE凝胶分析．．363．3．4IFA鉴定结果374讨论一395结论．．42参考文献．．43致谢50攻读学位期间发表论文情况。错误!未定义书签。山东农业大学硕士学位论文中文摘要禽白血病是由禽白血病／肉瘤病毒群引起的以造血细胞增生为主的一类肿瘤性疾病。禽白血病病毒(Avianleukosisvirus)属于反转录病毒科的a-反转录病毒属。根据其囊膜蛋白的不同，禽白血病在鸡的体内分为A、B、C、D、E、J六个亚群。其中，E亚群病毒为内源性禽白血病病毒，普遍存在于鸡群中，几乎没有致瘤性，对鸡群的影响较低。A、B、J

8、亚群是鸡群中引发肿瘤的主要外源性ALV，C、D亚群的外源性ALV较为少见。其他的