海南省菠萝主要病原真菌鉴定及病原病毒多重rtpcr检测体系的建立

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1、lI海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明．原创性声明本人溜霉声明：所蛩交的学位论文，遗本人在导婀的指静卜，独立迸f}研究1：怍所墩得的成粱。除文中已经注Ⅱ目引用的内容外，本论文不禽饪何其{也个入或艇体已经发袭或撰’i过的作晶或成果。对本文的研究做出霞婴负献的个人和集体，均已&文中以明确万式标明。本声嘲的法律绍粜由本人承担。论文作者签名：可乏．弋}一)蜀期：op，f竿·习山西学位论文版权使用授权说明本人完全了解海南入学关r收集、保存．篌埔学位论文的规定。髓：学拨有权保留弦淘国家有关部fj或机构送交论文的复印传和电子版，

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3、作者签名：鸭日期≤b，f年土HQbg二口匠摘要菠萝Ananascomosus(L．)Merr．，属凤梨科(Bromeliaceae)凤梨属(Ananas)多年生单子叶常绿草本果树植物，在我国主要分布于广东、海南、广西、台湾、福建、云南等省(区)，在海南菠萝更是著名的三大热带水果之一。在众多影响菠萝产业健康发展的因素中，病害因子一直以来都是影响海南菠萝生长生产的最重要因素，但由于缺乏系统性的调查研究，目前各界对海南省菠萝病害的了解还不甚深入和全面。本研究针对该问题，对海南省菠萝主产区真菌及病毒病害进行了较为系统、细致的调查

4、研究，取得以下主要结果：1．调查显示海南省菠萝主要病害有9种，其中以凋萎病(PineappleMealybugWilt．PMW)、炭疽病(ColletotrichumgloeosporioidesPenz．)、烂果病(Alternariaalternata(Fr‘．)Keissler)及心腐病(PhytophthoraparasiticaDast．)的危害最为普遍和严重，而灰斑病(Exserohilumrostratum(Drech)Leo．&Sug．)和轮斑病(ChaetomiumaureumChivers)为食用菠萝

5、上首次发现、报道。2．病原菌生物学特性研究表明：炭疽病病原菌(Cgloeosporioides)菌丝生长及孢子萌发最适温度分别为28℃和28,--,30℃：病原菌生长和孢子萌发最适pH值为7和6；麦芽糖为菌丝生长的最适宜碳源，葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖均为病原孢子萌发的适宜碳源；病原在含酵母浸粉的Czapek培养基上生长最好，酵母浸粉、天冬氨酸、牛肉浸膏和蛋白胨有利于孢子萌发；完全黑暗最利于菌丝生长，分生孢子在完全光照和光／暗交替条件下的萌发率较高；病原孢子水滴条件下的孢子萌发率最高；病菌致死温度为55℃处理10rain

6、。烂果病病原菌(Aalternata)菌丝生长和孢子萌发最适生长温度分别均为28℃；菌丝生长和孢子萌发最适pH值为9和8；麦芽糖为菌丝生长的最适宜碳源，蔗糖、半乳糖、果糖和木糖为病原分生孢子萌发的适宜碳源；病原生长的最适宜氮源为硝酸铵，酵母浸粉和天冬氨酸有利于孢子萌发；完全光照最利于菌丝生长，分生孢子在光／暗交替条件下萌发率最高；病原孢子在I№95％的条件下才能萌发，水滴条件下孢子萌发率最高：病菌致死温度为55℃处理20min。灰斑病病原菌(Erostratum)最适生长和萌发最适温度分别为28℃和30℃；病原生长和萌发

7、最适pH分别为8和7"8；半乳糖、蔗糖和麦芽糖为菌丝生长的最适宜碳源，木糖、蔗糖和麦芽糖较有利于孢子萌发；病原在含酵母浸粉、蛋白胨和硝酸铵的Czapek培养基上生长最好，酵母浸粉、牛肉浸膏和蛋白胨有利于孢子萌发；光暗交替最利于菌丝生长和孢子萌发；I№90％时，病原孢子开始萌发，水滴条件下病原孢子的萌发率最高(72．50"--'96．33％)；病菌致死温度为55℃处理15min。3．部分病原rDNA．ITS序列分析结果表明：2株烂果病病原菌和2株灰斑病病原菌的ITS序列分别为569bp和602bp，经比对与同源性分析，获得

8、的序列确为交链链格孢菌(么．alternata)和喙状凸脐孢菌(Erostratum．)的ITS序列，与形态学鉴定的结果相符，利用真菌rDNA．ITS序列分析对不能通过形态学特征直接鉴定出来的病原菌进行辅助鉴定、分类是可行、有用和可靠的。4．凋萎病疑似病株病原RT-PCR检测结果表明：所扩增到的4个目的片段大小分别为