kv1.5基因敲低对人乳腺上皮细胞增殖及akt信号通路的影响

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1、辽宁师范大学硕士学位论文摘要钾离子通道是种类最多、分布最广的一类离子通道，在可兴奋细胞、非可兴奋细胞的信号转导过程中起着极其重要的作用，参与细胞的增殖和分化等过程。Kvl．5钾通道(又称为KCNA5)是由KCNA5基因编码的蛋白，属于电压依赖型钾离子通道。自1990年首次从鼠脑内克隆成功后，人们陆续发现它广泛表达在脑、心脏、肝脏、肾等组织和器官以及多种肿瘤细胞中。研究表明，Kvl．5钾通道与乳腺癌的发生、发展有着密切的关系。因此，研究Kvl．5在乳腺细胞增殖中的作用及机制，进一步探讨Kv钾通道作为乳腺癌治疗的靶标，对临床预防

2、和治疗乳腺癌具有重要的意义。研究表明，许多类型的细胞的Kvl．5钾通道与胞膜窖或窖蛋白．1(Caveolin．1，Cav．1)存在紧密联系。本室前期工作表明，人乳腺上皮细胞MCFl0A中Kvl．5与Cav．1蛋白含量均显著多于人乳腺癌细胞MCF．7，这提示我们，Kvl．5钾通道可能与Cav一1相互联系，影响乳腺细胞增殖。本文利用RNAi技术建立Kvl．5基因敲低的稳定传代细胞模型MCFl0AKvL5(～，采用细胞计数法、免疫印迹、免疫荧光等方法研究Kvl．5在乳腺细胞信号转导和增殖过程中的作用及Kvl．5与Cav．1的相互作

3、用关系，旨在探讨Cav．1与Kvl．5相互作用调节增殖相关信号通路控制乳腺上皮细胞增殖的机制。结果：(1)利用RNAi技术建立了Kvl．5基因敲低的人乳腺上皮细胞模型MCFl0AKvl‘5(～，发现Kvl．5基因敲低后，细胞倍增时间延长，PCNA蛋白表达明显下调，细胞增殖受到抑制。(2)利用免疫印迹杂交技术研究Kvl．5基因敲低对MAPK和Akt通路激活的影响，发现Kvl．5基因敲低显著抑制MCFl0A细胞内Akt信号通路的激活，促进MAPK与Akt信号通路的交叉对话。(3)利用Kvl．5基因敲低的细胞模型MCFl0AKvl

4、‘5(。)和Cav．1基因敲低的细胞模型MCFl0AcE研究Kvl．5与Cav．1之间的相互作用，发现MCFl0A细胞内Cav．1与Kvl．5相互作用共同分布于胞膜窖，Cav．1基因敲低抑制Kvl．5在膜上的表达和分布。结论：Kvl．5基因敲低抑制人乳腺上皮细胞MCFl0A增殖，并通过与Cav．1相互作用抑制Akt信号通路的激活。关键词：Kvl．5；Cav-1；PI3K／Akt信号通路Kvl．5基因敲低对人乳腺上皮细胞增殖及Akt信号通路的影响EffectsofKv1．5geneknock-downonproliferati

5、onmediatedbyAktsignalingpathwayinhumanmammaryepitheliumcellsMCF10AAbstractK十channelisthemostabundantandwidelydistributedionchannel．Itplaysamajorroleinthesignaltransductionpathwayofexcitablecellsandunexcitablecellsandinvolvedincellproliferationanddifferentiationetc．

6、Kvl．5channel(alsonamedKCNA5)isencodedbyKCNA5gene，whichbelongstothefamilyofvoltage-gatedionchannel．Since1990，ithasbeenclonedfromratbrainforthefirsttime，KVl．5wasfoundinmanytissuesincludingbrain，heart，liver，kidneyandsomeoftheirmalignantcounterparts．Manyreportsindicate

7、dthatIo1．5iscorrelatedcloselytothegenerationanddevelopmentofbreastcancer．Thus，researchonKvl．5mechanismincellproliferationandfurtherinvestigationofKvl．5astherapeutictargetisimportanttoclinicalpreventionandtreatmentofbreastcancer．Studieshaveshown也atKvl．5channelswasas

8、sociatedwithCaveolin一1(Cav一1)inmultiplecelltypes．OurpreviousworkshowedthattheexpressionofKvl。5andCav-1inMCF-7cellsweresignificantlylowerthanthato