晶状体上皮细胞tgfβsmad信号转导通路的研究

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1、天津医科大学博士学位论文中文摘要}P目的：后囊膜混浊(Posteriorcapsuleopaeification，PCO)是白内障术后引起视力下降的常见并发症。晶状体上皮细胞TGF-B／Smad信号转导途径得到越来越多的关注。本文采用RNA干扰技术，分别阻断TGF．B2／Smad2、TGF．B2／Smad3和TGF．B2／Smad2&3信号转导通路。研究目的是构建Smad2和Smad3siRNA的表达质粒，以HLEB．3细胞为研究对象，探讨TGF-B2／Smad2和TGF-B2／Smad3信号传导途径分别对于HLEB．3细

2、胞增殖、迁移和细胞外基质产生的调节作用，评价其在后囊膜混浊发生中的作用。方法：本研究包括两部分：1．分别设计人晶状体上皮细胞的siRNA，以pSileneer2．1．U6neo为质粒载体，构建Smad2和Smad3的siRNA表达质粒，转化大肠杆菌，酶切、测序进行鉴定。2．体外培养HLEB．3细胞，利用siRNA分别阻断Smad2，Smad3，Smad2和&3信号传导途径。通过MTT和细胞生长曲线实验评价细胞增殖，通过transwell和划痕实验评价细胞迁移，通过real-timePCR评价aSMA、纤维素和I型胶原的表达

3、。结果：1．合成的DNA序列退火后克隆到pSileneer2．1-U6neo质粒载体上，进行酶切、测序分析，确定为所需序列。2．阻断Smad2组MTT实验570rim光吸收值和细胞生长曲线细胞计数TGF．B2组明显低于对照组(P

4、．05)，MTT实验570rim光吸收值，细胞生长曲线细胞计数，纤维素和I型胶原表达TGF．B2组与对照组没有显著性差异(尸>0．05)。同时阻断Smad2和Smad3组，MTT实验570rim光吸收值和细胞生长曲线细胞计数，aSMA、纤维素和I型胶原表达，划痕实验细胞迁移距离和transwell迁移细胞数TGF-132组与对照组没有显著性差异(P>0．05)。结论：1．Smad2和Smad3siRNA表达质粒能有效阻断TGF．B2／Smad2、TGF．B2／Smad3和TGF．1]2／Smad2&3信号转导通路，及Sma

5、d2和Smad3mRNA和蛋白的表达。2．Smad3可以阻断TGF．B2对于细胞增殖和ECM产生的调节，阻断Smad2可以阻断TGF．B2对于细胞迁移和aSMA产生的调节。3．Smad2耗竭可以加强Smad3的活性，Smad3耗竭可以加强Smad2的活性。4．只有阻断天津医科大学博士学位论文Smad2和Smad3信号转导通路，才可以有效阻断TGF．B2在晶状体上皮细胞增殖、迁移和ECM产生的调节作用。从而有效阻断PCO的形成。L■■■■■■，．√●◆关键词：RNA干扰晶状体上皮细胞后囊膜混浊TGF-BSmadII天津医科大

6、学博士学位论文Abstract■kObjective：Posteriorcapsuleopacificationif,co)isthemostcommonpost-operative秘complicationofcataractsurgerycausingvisualloss．Currently,increasingattentionisdirectedattheTGF—B／Smadsignalingpathwaysinlensepithelialcells．ThesignalingpathwayofTGF—B2／Smad

7、playsallimportantroleinthepathologicalprocessinposteriorcapsuleopacificationaftercataractsurgery．Smad2andSmad3arebothreceptor-regulatedSmads(R—Smads)oftheTGF-B2signalingpathway．WeusedRNAinterferencetechniquetoinhibitTGF—B2／Smadsignalingpathway．WeconstructedSmad2an

8、dSmad3siRNAexpressionvectorsandinvestigatewhetherknockdownofSmad2，Smad3，orSmad2&3playsakeyroleinPCOpathology．ThesignalcharacteristicsofTGF-B2andSmadprot