《保护碱基》word版

《《保护碱基》word版》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、在引物设计时在5端添加保护碱基为什么要添加什么情况下要添加作用呢在引物设计时在5端添加保护碱基为什么要添加什么情况下要添加作用呢匿名提问2009-04-2910:24:07发布工程学术自然科学设计化学学科4个回答·回答·东少儿

2、2009-04-2910:31:17·一般情况下，一对引物间不应多于4个连续碱基的同源性或互补性。...添加酶切位点是将PCR产物进行亚克隆使用得最多的手段。一般酶切位点是六个碱基，另外在酶切位点...·skill01234

3、2009-04-2910:36:27·引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR产物的特异性取决于引物与模板DNA

4、互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。但在设计引物时还应该遵循以下原则：①引物长度：15-30bp，常用为20bp左右。②引物扩增跨度：以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3’端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。⑤引物3

5、’端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。⑥引物中有或能加上合适的酶切位点，被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。·edwen321

6、2009-07-3015:20:35·一般的PCR引物不需要加保护碱基的，但是如果你是做克隆，想将扩增的目的片段连接到载体上，在酶切位点的外侧就要加保护碱基，这样是为了保证内切酶可以顺利的切割目的片段，到底要加几个保护碱基要看你用的是那个公司的酶，TAKARA的一般加两个或三个保护碱基，

7、TAKARA目录上有详细的说明。·TooThFiend

8、2009-08-2922:25:11·碱基互补配对原则　　碱基互补配对原则theprincipleofcomplementarybasepairing　　在DNA分子结构中，由于碱基之间的氢键具有固定的数目和DNA两条链之间的距离保持不变，使得碱基配对必须遵循一定的规律，这就是Adenine（A，腺嘌呤）一定与Thymine（T，胸腺嘧啶）配对，Guanine（G，鸟嘌呤）一定与Cytosine（C，胞嘧啶）配对，反之亦然。碱基间的这种一一对应的关系叫做碱基互补配对原则。　　腺嘌呤与胸腺嘧啶之间有两个氢键，

9、鸟嘌呤与胞嘧啶之间有三个氢键，即A＝T,G≡C　　根据碱基互补配对的原则，一条链上的A一定等于互补链上的T；一条链上的G一定等于互补链上的C，反之如此。因此，可推知多条用于碱基计算的规律。　　规律一：在一个双链DNA分子中，A=T、G=C。即：A+G=T+C或A+C=T+G。也就是说，嘌呤碱基总数等于嘧啶碱基总数，各占全部碱基总数的50%。　　规律二：在双链DNA分子中，两个互补配对的碱基之和的比值与该DNA分子中每一单链中这一比值相等。(A1+A2+T1+T2)/(G1+G2+C1+C2)=(A1+T1)/(G1+C1)=(A2+T2)/(G2+C2)　　规律

10、三：DNA分子一条链中，两个不互补配对的碱基之和的比值等于另一互补链中这一比值的倒数，即DNA分子一条链中的比值等于其互补链中这一比值的倒数。(A1+G1)/(T1+C1)=(T2+C2)/(A2+G2)　　规律四：在双链DNA分子中，互补的两个碱基和占全部碱基的比值等于其中任何一条单链占该碱基比例的比值，且等于其转录形成的mRNA中该种比例的比值。即双链(A+T)%或(G+C)%=任意单链(A+T)%或(G+C)%=mRNA中(A+U)%或(G+C)%。　　规律五：不同生物的DNA分子中，其互补配对的碱基之和的比值(A+T)/(G+C)不同，代表了每种生物DN

11、A分子的特异性。　　关于碱基互补配对规律的计算，其生物学知识基础是：基因控制蛋白质的合成。由于基因控制蛋白质的合成过程是：（1）微观领域———分子水平的复杂生理过程，学生没有感性知识为基础，学习感到非常抽象。（2）涉及到多种碱基互补配对关系，DNA分子内部有A与T配对，C与G配对；DNA分子的模板链与生成的RNA之间有A与U配对，T与A配对，C与G配对。学习过程中，学生不易认识清楚。（3）涉及许多数量关系（规律），在DNA双链中，①A等于T，G等于C，A+GT+C　　等于A+G　　T+C　　等1。②一条单链的A+GT+C　　的值与另一条互补单链的A+GT+C　　

12、的值互为倒数。③一条单链