《银杏黄酮的制备》word版

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1、组长：组员：Tel:E-mail:236150351@qq.comQQ：236150351指导老师：刘宝全2013年09月25日实验申请实验项目：银杏黄酮的制备实验原料：银杏叶粉，对照品芦丁实验仪器：（1）大孔吸附树脂（2）722型分光光度计（3）真空泵（4）超声波细胞粉碎机（5）微波炉实验试剂：乙醇（20%、70%、90%），亚硝酸钠溶液（5%），1MNaOH，硝酸铝（10%）耗材及辅助器材：（1）移液管1ml×1，5ml×1，10ml×1（2）容量瓶25ml×12，500ml×1，100ml×4（3）洗耳球（4）胶头滴管（5）布氏漏斗（6）量筒20ml

2、×1，100ml×1（7）抽滤瓶实验操作操作步骤：²黄酮的提取：1.校正天平，然后称取处理好的银杏叶粉末1g。2.将所称样品加入50ml70%乙醇中，搅拌混匀。3.将上述溶液在微波炉中火条件下（10s+10s）处理3次。4.然后超声破碎（5s+6s）60次,测量体积V1，然后搅拌6min.5.用循环水真空泵过滤。12wzcc-6.滤液用大孔树脂法精制7.装柱：树脂柱高度约为4cm。8.取滤液上柱吸附，重复2次，收集流出液，记录体积V2。9.洗涤：用无水乙醇洗涤树脂2次，流出液为无色透明，再用高纯水洗涤树脂柱，直至无醇味。10.洗脱：用90%乙醇进行洗脱，收

3、集流出液V3，进行黄酮浓度测定。11.制作芦丁标准曲线并测定黄酮含量。12.结束，整理实验台。²标准曲线的制定及黄酮含量的测定：1.准确配制0.292g/L的芦丁标准液2.分别取1ml，2ml，3ml，4ml，5ml，6ml，7ml，8ml，9ml，标准液和样品液1ml置于25ml容量瓶中3.加20%乙醇至12.5ml,加0.5ml亚硝酸钠溶液（5%）4.放置5min后加0.5ml硝酸铝（10%）5.放置5min后加5ml1mol/LNaOH，混匀6.用20%乙醇稀释至刻度，10min后在510nm处进行比色测定，同时做空白对照。记录数值。7.结束，整理操

4、作操作流程图：12wzcc-微波辅助浸提称取银杏叶粉末1g加70%乙醇50ML样品溶解超声波辅助浸提循环水真空泵过滤精制测V1装柱洗柱黄酮吸附洗脱洗脱收集V2黄酮含量测定结束制作标准曲线实验记录试管标号012345样品芦丁标准液/ml0123457芦丁标准液含量（mg）00.2920.5840.8761.1681.46x12wzcc-OD值510nm00.0590.1180.1700.2300.2830.072实验总结²数据统计：试管标号012345样品芦丁标准液/ml0123457芦丁标准液含量（mg）00.2920.5840.8761.1681.460

5、.401OD值510nm00.0590.1180.1700.2300.2830.072已知芦丁标准液的浓度c=0.292g/L，所以有上述计算结果。12wzcc-计算：1ml样品的OD值为0,072，带人代入标准曲线Y=0.1967X-0.0069X=(mg)叶片干粉质量m1=3.015g最后流出液体积V=41ml银杏叶粉黄酮的含量得率=X×÷m÷1000×100%=0.401×÷3.015÷1000×100%=0.273%误差分析：1.仪器与操作人员本身存在着误差。2.由于抽滤两次，所以黄酮含量有所损失3.在吸附前，虽然经过多次洗树脂柱，但由于某些因素，

6、树脂柱可能没有完全洗净。4.为了保证精制黄酮纯度高，多次用90%乙醇洗涤，所以最终12wzcc-流出液体积较大。5.在进行吸光值测量时，只用配套的两支比色皿进行比色，一支测空白，另一支测其它，这样能减少比色皿带来的实验误差。比色皿放置于第1、3暗格中，这样方便取用。²注意事项：1.微波萃取与超声波破碎时，中间应间隔几秒，间隙时间应大于或等于超声时间，以便于热量散发。时间设定应以超声时间短，超声次数多原则，可延长超声机子以及探头的寿命。2.树脂柱底端应放一团棉花，防止液体未被吸附就流下；在装柱时必须防止气泡、分层及柱子液面在树脂表面以下等现象发生。3.一直保

7、持流速缓慢以加强吸附性，并注意勿使树脂表面干燥。4.分光光度计应预热30min左右后再进行测量，保证读数稳定。5.天平使用方法：a.将天平至于干净平整台面，调节水平（气泡位于圆圈内）。b.接通电源。c.放已知砝码称重。d.准则称量药品。不准则校正，然后称量。6.侧吸光值时，最好只用两个比色皿，以减小因比色皿带来的误差。7.在加入试剂5~20min内测定吸光值，因为这段时间内颜色最稳12wzcc-定。8.微波炉不空转，不放金属。²实验讨论：Ⅰ.实验目的：1.了解黄酮类物质的分离，提取和检测方法。2.了解大孔吸附树脂的特征和在生化分离中的应用。Ⅱ.实验原理：1

8、.提取：溶剂提取法：一般指从中草药中提取有效部位的方法，根据中草药