显微镜直接计数法实验报告

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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划显微镜直接计数法实验报告　　微生物学实验报告　　题目：微生物大小的测定及显微镜直接计数法姓名：学号：年级班级：组别：同组者：时间：　　【目的要求】　　1．学习并掌握使用显微镜测微尺测定微生物大小的方法。　　2．了解血球计数板的构造、明确其计数原理。　　3．学习并掌握使用血球计数板测定微生物细胞或孢子数量的方法。　　【基本原理】　　l．测微尺的构造：显微镜测微尺是由目镜测微尺和镜台接物测微尺组成目镜测微尺是一块圆形玻璃片，其中有精确的等分刻度，在5mm刻尺上分50份。目镜测微尺每格

2、实际代表的长度随使用接目镜和接物镜的放大倍数而改变，因此在使用前必须用镜台测微尺进行标定。　　镜台测微尺为一专用的载玻片，中央有精确等分线将长为1mm的直线等分成100个小格，每格长10μm，专用于校正目镜测微尺。　　2.球菌用直径表示大小；杆菌用宽和长来表示　　图一：测微尺的校正目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　3．显微直接计数法：将小量待测样品悬浮液置于计菌器上，于显微镜下直接计数

3、的一种简便、快速、直观的方法。　　显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如酵母、细菌、霉菌孢子等。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽细菌计数板或Hawksley计数板。三种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。　　血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间较宽的平台，被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区。计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个中方格，而

4、每个中方格又分成16个小方格。计数区由400个小方格组成。每个大方格边长为1mm，其面积为lmm2，盖上盖玻片后，盖载玻片间的高度为，所以每个计数区的体积为。使用血球计数板计数时，通常测定五个中方格的微生物数量，求其平均值，再乘以25或16，就得到一个大方格的总菌数，然后再换算成1毫升菌液中微生物的数量。设5个中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数B，则：　　A1mL菌液中的总菌数=5×25×104×B=5×104×A·B　　A=5×16×104×B=×104×A·B目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为

5、了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　【实验器材】　　1．菌种：酿酒酵母，枯草芽孢杆菌(Bacillussubitilis)　　2．仪器、材料：显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、擦镜纸、香柏油、血球计数板、盖玻片、吸水纸、计数器、无菌滴管等。　　【操作步骤】　　1．微生物大小的测定。　　目镜测微尺的安装　　把目镜的上透镜旋开，将目镜测微尺轻轻放在目镜的隔板上，使有刻度的一面朝下。旋上目镜透镜，再将目镜插入镜筒内。　　校正目镜测微尺　　将镜台测微尺放在显微镜的载物台上，使有刻度的一面朝上。先用低倍镜观察，调焦距，待看清

6、镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度相平行，利用推进器移动镜台测微尺，使两尺在某一区域内两线完全重合，然后分别数出两重合线之间镜台测微尺和目镜测微尺所占的格数。用同样的方法换成高倍镜和油镜进行校正，分别测出在高倍镜和油镜下两重合线之间两尺分别所占的格数。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　由于已知镜台测微尺每格长10μm，根据下列公式即可分别计算出在不同放大

7、倍数下，目镜测微尺每格所代表的长度。　　两重合线间镜台测微尺格数×10目镜测微尺每格长度=两重合线间目镜测微尺格数　　菌体大小的测定　　将镜台测微尺取下，换上细菌染色制片，先在低倍镜和高倍镜下找到目的物，然后在油镜下用目镜测微尺测量菌体的大小。先量出菌体的长和宽占目镜测微尺的格数，再以目镜测微尺每格的长度计算出菌体的长和宽。　　值得注意的是，和动植物一样，同一种群中的不同菌体细胞之间也存在个体差异，因此在测定每一种菌种细