高效液相色谱法测定人血浆中依诺沙星含量及药动学研究

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果高效液相色谱法测定人血浆中依诺沙星含量及药动学研究作者：孙亚欣丁艳萍何晓静肇丽梅【摘要】目的建立测定人血浆中依诺沙星浓度的高效液相色谱方法。方法血浆样品经甲醇沉淀蛋白后，以乙腈∶/L柠檬酸缓冲液(15∶85，)为流动相，经HypersilBDSC18(×150mm，5μm)色谱柱分离，345nm波长检测。结果依诺沙星在～μg/ml浓度范围内线性关系良好，低、中、高三个浓度的提取回收率为%～%，日内、日间

2、相对标准差为%～%。结论本方法准确、快速，可满足临床药动学研究的要求。【关键词】依诺沙星高效液相色谱法药动学DeterminationofenoxacininhumanplasmabyABSTRACTObjectiveAnHPLCmethodwasestablishedfordeterminationofenoxacininhumanserum.MethodsSerumprotEinwasprecipitatedwithmethanol.TheanalysiswasconductedwithaHypersilBDSC1(×150mm,

3、μm)column,acetonitrile∶/Lcitricbuffer(15∶85,)asmobilephase,andthedetectingwavelenghwasat4nm.ResultsThelinearrangeenoxacinwas～μg/mlandtherecoverieswereintherange%～%atthreedifferentconcentrations.TheRSDofintraandinterdaywereintherange%～%.ConclusionThis课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二

4、年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果methodissuitableforthepharmacokineticstudyofenoxacin.KEYWORDSEnoxacin;HPLC;Pharmacokinetics依诺沙星又名氟啶酸，是第三代喹诺酮类广谱抗生素，通过作用于细菌DNA螺旋酶，抑制细菌DNA的合成和复制而导致细菌死亡。临床上用于敏感菌所致的急性呼吸系统

5、、泌尿系统、消化道及皮肤软组织等感染的治疗［1］。有关依诺沙星浓度测定的方法国内、外都有报道，有采用LC/MS/MS法［2］、荧光法［3］、微生物法［4］、微透析法［5］，常用HPLC紫外检测［6，7］。本文建立了测定血浆中依诺沙星的高效液相色谱法，该方法简便，快捷，并研究了该药的体内药动学行为，为临床研究提供方法和依据。1仪器与试药HP1100系列高效液相色谱仪(Agilent公司)，GL20GII高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)。依诺沙星对照品(含量%，山东罗欣药业股份有限公司提供)；依诺沙星片(山东新华制药股份有限产品，

6、规格为每片200mg，批号)。甲硝唑对照品(内标物，中国药品生物制品检定所)；乙腈、甲醇为色谱纯；柠檬酸和三乙胺均为分析纯。空白血浆由中国医科大学附属二院输血科提供。方法与结果.1色谱条件课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果色谱柱为HypersilBDSC18柱(×150mm，5μm)；流动相为乙腈∶柠檬酸缓冲液(15∶85，)

7、(缓冲盐为每1000ml溶液加三乙胺6ml调至)；流速/min；检测波长345nm；柱温30℃。.2血浆样品处理取血浆样品，于具塞塑料离心管中，补加50μl甲醇，加入内标(10μg/ml甲硝唑甲醇溶液)50μl，加甲醇涡旋混合1min，10000r/min离心10min，移取上清液于另一洁净试管中，55℃氮气吹干上清，200μl甲醇溶解残渣，取20μl上清液进样，记录色谱图。.3标准曲线取空白血浆，依次加入浓度为、、、、、和μg/ml的依诺沙星标准系列的甲醇溶液50μl，配制相当于、、、、、和μg/ml的血浆样品，按“”项下的方法操作，

8、制备标准曲线。以待测物浓度C为横坐标，待测物与内标物的峰面积比(Y)为纵坐标，用加权最小二乘法进行回归运算，得直线回归方程：Y=r=(n=3).4方法专属性考察课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出