tgfβ1—smad3—ilk信号转导通路和大鼠肝纤维化相关性探究

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1、TGFB1—Smad3—ILK信号转导通路和大鼠肝纤维化相关性探究［摘要］目的研究TGFP1-Smad3-ILK信号转导通路与大鼠肝纤维化的关系。方法建立40%CC14诱导的大鼠肝纤维化模型。60只SD大鼠随机分为5组：正常对照组、模型2周组、模型4周组、模型6周组、模型8周组。对模型2、4、6、8周组及对照组大鼠行HE染色、网状纤维染色、免疫组织化学反应，观察肝组织病理变化、纤维增生及ILK和TGFB1-Smad3的表达情况。结果免疫组织化学染色显示，ILK和TGFB1-Smad3在正常的肝组织中几乎没有表达。在注射CC14后，大鼠肝脏组织中ILK和TGFB1-Smad3

2、较正常对照组表达明显增强，模型2、4、6、8周组中ILK和TGFB1-Smad3的表达程度呈明显递增趋势，表明大鼠肝组织纤维化与ILK和TGFB1-Smad3的表达有关。结论ILK和TGFB1-Smad3的表达可能与大鼠肝纤维化有联系，如能继续深入研究TGFB1-Smad3-ILK信号转导通路在肝纤维化中的发生机制，或许可为肝纤维化的防治提供新的理论依据。［关键词］TGFB1-Smad3；ILK；信号转导通路；肝纤维化［中图分类号］R-332［文献标识码］A［文章编号］1674-4721(2013)12(c)-0014-06肝纤维化指多种慢性肝病共同病理变化的过程，也是肝硬

3、化恶化、发展的重要环节。现阶段，肝纤维化化是可逆的,对于肝纤维化进行早期诊断、早期治疗，能够有效抢救治疗慢性肝病患者，降低社会经济损失。本研究主要探讨转化生长因子Bl（TGFB1）-Smad3-整合素连接激酶（ILK）信号转导通路与大鼠肝纤维化的关系。1材料与方法1.1动物与材料本次研究试验动物选取健康雄性SpragueDawley（简称SD）大鼠60只，体重200〜260g,由江西中医学院实验动物中心提供。全部SD大鼠根据常规饲养条件将室温调节至（21±3）°C,调节湿度为（54±6）%,每天喂养12h,均给予普通饲料，并且自由进食、进水。垫料应每周更换2次。大鼠TGFB

4、1单克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司。1.2实验方法应用40%CC14制备大鼠肝纤维化模型。将60只大鼠随机分成正常对照组（12只）、模型2周组（12只）、模型4周组（12只）、模型6周组（12只）、模型8周组（12只）。模型组按首次0.5ml/100g,以后0.3ml/100g给予40%CC14中性花生油腹腔注射，每周进行2次，共计8周。每周测量一次大鼠体重，并给予合理剂量调整。正常对照组采用等量生理盐水腹腔注射，每周2次。从腹腔注射CC14诱导液以后1周开始，每隔2周时间处死1组模型组大鼠，直到第8周组，在最后一次注射诱导液后24h处死大鼠。正常组12只大鼠统一于

5、第8周末处死。将处死的大鼠仔细摘除肝脏，取其肝脏标本待查。取小块肝脏组织固定于预先配置的10%甲醛中，常规制备石蜡切片，比较2、4、6、8周4个组大鼠肝纤维化模型与对照组大鼠之间的免疫组织化学反应、网状纤维染色以及肝苏木素-伊红染色，同时注意肝组织病理改变情况、纤维增生程度及ILK和TGFB1-Smad3的表达情况。1.3病理学检查肝组织用10%中性福尔马林液固定，通过常规方法加以免疫组织化学反应、网状纤维染色以及肝苏木素-伊红染色,注意每组大鼠肝组织病理改变、纤维增生程度及ILK和TGFB1-Smad3的表达情况。1.4肝纤维化半定量积分通过王泰龄等［1］研究人员改进的C

6、hevallier计分法制订纤维化程度计分标准，具体见表1。表1纤维化程度计分标准计分表示为L+P+2(NXW)；*标本内仅一细纤维隔，W计分0.5分1.5ILK和TGFB1-Smad3免疫组织化学染色结果评定：在高倍镜(X400)观察下，随机性观察5个视野，每个视野中细胞计数应该＞300个，染色结果需与阳性细胞比例、着色深浅程度相对比予以半定量分析。结果评判标准：将细胞膜、细胞质染色表现黄色-棕褐色作为阳性细胞，没有着色作为阴性细胞。同时按照每张切片显示的阳性细胞比例、着色深浅程度进行积分。具体积分：阳性细胞51%视为3分。着色深浅程度：没有着色记为0分（即为阴性），浅黄

7、色记为1分（即为弱阳性），棕黄色记为2分（即为阳性），棕褐色记为3分（即为强阳性）。最后按照两者之间乘积加以统计分析，结果0分表示阴性，1、2分表示+,3、4分表不++,6、9分表不+++。1.6统计学处理所得数据采用SPSS14.0统计软件进行统计学分析，通过多个独立样本对比Kruskal-WallisH检验各组间差异，各组间两两对比采用多个独立样本中Nemenyi法两两比较加以检验，应用秩相关分析两个分类变量的相关性，以P2.3网状纤维染色改变的情况研究可见肝窦网状纤维表现为黑色，而汇管区胶原表现为黄色。正常对