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1、贵州宏奇药业有限公司银黄颗粒微生物限度检查方法验证验证人：顾荣跃验证单位：贵州宏奇药业有限公司验证日期：2014年11月原始资料保存处：贵州宏奇药业有限公司联系人：李天权联系电话：0858-5315027转210贵州宏奇药业有限公司银黄颗粒微生物限度检查方法【处方】金银花提取物（以绿原酸计）2.4g;黄苓提取物（以黄苓昔计）24g【制法】以上二味，加蔗糖粉480g与淀粉适量，粉碎成细粉，混匀，制成颗粒，60°C以下干燥,制成600g,即得。【用法用量】开水冲服。一次1〜2袋，一日2次。【规格】每袋装4g【微生物限度检查】
2、细菌：取供试品10g,加pH7.0无菌氯化钠•蛋白月东缓冲液至100ml,充分混匀，作为1:10供试液。取1:10供试液4ml加入pH7.0无菌氯化钠■蛋白月东缓冲液至10ml,充分混匀，作为1:25供试液。取1:25供试液1ml分别注入5个平皿中，每皿0.2ml（平行操作两份）。按中国药•典2010年版一部附录XIIIC微生物限度检查法中培养基稀释法检查。霉菌及酵母菌：取1:10供试液2ml,每1ml注入1个平皿中（平行操作两份）。按中国药典2010年版一部附录XIIIC微生物限度检查法平皿法检查。控制菌检查：大肠埃希
3、菌：取1:10的供试液按中国约典2010年版一部附录XIIIC微生物限度检查法规定的相应方法检验。胆盐乳糖增菌液的用量为100mlo银黄颗粒微生物限度检查方法验证报告一、检验口的：确认对供试品进行微牛物限度检查吋，所采用的细菌、霉菌及酵母菌计数方法和控制菌检查方法是否适合于该样品的微牛物限度检查。二、样品:银黄颗粒批号:2014110K20141102、20141103规格：每袋装4g生产企业：贵州宏奇药业冇限公司供样单位：贵州宏奇药业有限公司三、培养基胆盐乳糖增菌液批号:140309玫瑰红钠琼脂批号：140511营养琼
4、脂批号:140211营养肉汤批号：140509改良马丁批号：131240改良马丁琼脂批号：140311麦康凯琼脂(MacC)批号:140206(以上培养基均出上海闿微生物科技冇限公司提供)四、菌种枯草芽抱杆菌(Bacillussubtilis)[CMCC(B)63501]金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)[CMCC(B)26003]大肠埃希菌(Escherichiacoli)[CMCC(B)44102]白色念珠菌(Candidaalbicans)[CMCC(F)98001]黑曲霉菌(Aspergi
5、llusnier)[CMCC(F)98003](以上菌种由贵州省药品检验所提供)五、试验所用仪器202-3AB型电热恒温干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司)280A型立式电热压力蒸汽灭菌器(上海东亚压力容器制造有限公司)LRH150-150-B型生化培养箱(广东省医疗设备厂)HH.BHII500型电热恒温培养箱(上海跃进医疗器械厂)HH.BHII420型电热恒温培养箱(上海跃进医疗器械厂)六、菌液制备与检验1、取经37°C培养18〜24小时的金黄色葡萄球菌、枯草芽砲杆菌、大肠埃希菌的肉汤培养物lml,用0.9%无菌氯化钠溶
6、液10倍稀释至10,〜10刁，约为50〜100cfu/m1的菌液，做活菌计数备用。2、取经25〜28°C培养18~24小时的白色念珠菌液体培养物lml,用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-5-10-6,约为50〜100cfu/ml的菌液,做活菌计数备用。3、取经25°C培养1周的黑曲霉菌斜面培养物，加5ml0.9%无菌氯化钠溶液洗下黑曲霉菌泡子，吸取出饱子悬液lml,加0.9%无菌氯化钠溶液适量稀释，取lml稀释后的抱子悬液,用0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至10-4,约为50〜100cfu/ml的菌液，做活菌计
7、数备用。4、菌液的检验4.1取上述金黄色葡萄球菌、枯草芽孑包杆菌、大肠埃希菌10,〜i（y7稀释液iml,用45°C营养琼脂培养基20ml注皿，各平行测定两1111,30〜35°C培养48小时，计数，应约为50〜100cfu/ml。4.2取上述白色念珠菌KT'〜IO”稀释液及上述黑曲霉菌菌10“他子悬液各lml,用45°C玫瑰红钠琼脂培养基20ml注皿，各平行测定两皿，23〜28°C培养，逐日观察计数，应约为50〜100cfu/ml。七、细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证检验依据：参照屮国药典2010版一部微生物限度检查法
8、（附录XIIIC）1、供试液制备：取样品10g,加入pH7.0无菌氯化钠一蛋口月东缓冲液至100ml,混匀，作为1:10的供试液。取1:10供试液4ml加入pH7.0无菌氯化钠■蛋白豚缓冲液至10ml,充分混匀,作为1:25供试液。2、回收率测定:2」细菌回收率的测定（培养基稀释法）2.11试验组：取1:25供试液l
