微生物鉴定中常用的生理生化试验的观察

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1、微生物鉴定中常用的生理生化试验的观察姓名：俞华军班级：09牛科三班学号：200900140157日期：2010/12/04组别：四同组者：谢英健张刚刚岳永胜余振洋一.实验目的1•证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。2.掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。3.了解糖发酵的原理在肠细菌鉴定中的重要作用。4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。5•了解耐喙、甲基红试验的原理及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法二.实验原理1•大分子物质的水解试验微生物对人分子物质如淀粉、蛋白质

2、和脂肪不能直接利用，必须依靠产生的胞外酶将大分子物质水解后，才能被微生物吸收利用。胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大分子物质为较小化合物，使其能被运输至细胞内。A.淀粉水解试验某些细菌能够分泌一种胞外酶，即淀粉酶。它可将淀粉水解为小分子的糊精、麦芽糖和葡萄糖，再被细菌吸收利用。淀粉遇碘液会产生蓝色，因此能产淀粉酶的微生物在含淀粉培养基上培养后，由于淀粉被细菌的淀粉酶水解，遇碘不再变蓝色，培养基上菌体周围会出现无色透明圈。据此可分辨微生物能否产生淀粉酶。如菌苔周围出现无色透明圈，说明淀粉已被水解，为阳性。透明圈的大小可初步判定

3、该菌水解淀粉能力的强弱，即产生胞外淀粉酶活力的高低。B.油脂水解试验脂肪水解后产生脂肪酸可改变培养基的pH,使pH降低，加入培养基的中性红指示剂会使培养基从淡红色转变为深红色，说明细胞外存在脂肪酶。培养基屮菌苔出现红色斑点，说明脂肪水解，为阳性反应。2.糖发酵试验糖发酵试验是最常用的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖的能力上有很人的差异，有些细菌能分解某种糖并产酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和气体（如氢、甲烷、二氧化碳等）；有些细菌只产酸不产气。例如大肠杆菌能分解乳糖和

4、葡萄糖产酸并产气；伤寒杆菌能分解葡萄糖产酸不产气，不能分解乳糖；普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。酸的产生可利用指示剂来断定。在配制培养基时预先加入澳甲酚紫[pH5・2（黄色）一6.8（紫色）],当发酵产酸吋，可使培养基由紫色变为黄色。气体的产生可由发酵管屮倒置的德汉氏小管屮有无气泡来证明。3.口引喙和甲基红试验A.呵喙试验卩引卩朵试验是用来检测卩引味的产生。有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白腺中的色氨酸产生喝喙和丙酮酸。口引喙与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰呵味。但并非所有微生物都具有分解色氨酸产生呵味的

5、能力,因此眄I味试验可以作为一个生物化学检测的指标。色氨酸水解反应：c-ch2chnh2cooh,/CH+H20色抵酸+NH、+CH」COCOOH卩引嗥与对二甲基氨基苯甲醛反应:大肠杆菌眄I味反应阳性，产气肠杆菌为阴性。B.甲基红试验甲基红试验是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。当细菌代谢糖产牛酸时，培养基就会变酸，使加入培养基的甲基红指示剂由橘黄色(pH6.3)变为红色(pH4.2),即甲基红反应。尽管所有的肠道微生物都能发酵葡萄糖产生有机酸，但这个试验在区分大肠杆菌和产气肠杆菌上仍然是有价值的。这两个细

6、菌在培养的早期均产生有机酸，但大肠杆菌在培养后期仍能维持酸性pH4,而产气肠杆菌则转化有机酸为非酸性末端产物，如乙醇、丙酮酸等，使pH升至大约6。因此大肠杆菌为阳性反应，产气肠杆菌为阴性反应。一.实验器材1.菌种:枯草芽抱杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄杆菌、铜绿假单胞菌、普通变形菌、产气肠杆菌。2.培养基:淀粉培养基、油脂培养基、葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基、蛋白腺水培养基、葡萄糖蛋白腺水培养基。3.仪器或其他用具：卢戈氏碘液、甲基红指示剂、乙醛、呵味试剂、培养皿、试管、接种环、试管架、徳汉氏小管、酒精灯。二.实验步骤1.大

7、分子物质的水解试验A.淀粉水解试验(I)将固体淀粉培养基灭菌熔化后冷却至50°c左右，无菌操作制成平板。（2）用记号笔在平板底部划成四部分，并在四部分上本别写上枯草芽抱杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄杆菌、铜绿假单胞菌四种菌的菌名。（3）用无菌操作（点接种法）将枯草芽孑包杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄杆菌、铜绿假单胞菌分别接在平板指定的区域上。（4）将平板倒置在37°C温箱中培养2d。（5）两天后，观察各种细菌的生长情况，打开平板盖子，滴入少量卢戈氏碘液于平板中，轻轻旋转平板，使碘液均匀铺满整个平板，观察出现的情况并记录。B.油脂水解

8、试验（1）将固体淀粉培养基灭菌熔化后冷却至50°C左右，并充分摇荡，使油脂分布均匀，无菌操作制成平板。（2）用记号笔在平板底部划成四部分，并在四部分上木别写上枯草芽孑包杆菌、犬肠杆菌、金黄色葡萄杆菌、铜绿假单胞菌四种菌的菌名。（3）用无菌操作（点接种法）将枯草芽抱杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄