资源描述：
《1在造血干-祖细胞连续移植中对抗细胞衰老作用探究'--人参皂》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、1在造血干/祖细胞连续移植中对抗细胞衰老作用探究'>人参皂昔Rgl在造血干/祖细胞连续移植中对抗细胞衰老作用探究摘要目的：探讨人参皂昔Rgl在造血干/祖细胞(HSC/HPC)连续移植中对抗细胞衰老的作用。方法：免疫磁性分选法分离纯化的雄性供体小鼠Sca-1+HSC/HPC连续移植3代构建HSC/HPC衰老体内模型。60CoY射线致死剂量辐射雌性受体鼠后分4组：对照组、衰老模型组、Rgl治疗衰老组、Rgl延缓衰老组。荧光定量PCR检测受体鼠骨髓细胞Y染色体(Sry基因)表达，确定受体鼠重建造血细胞来源；观察受体鼠存活时间及外周血血象指标的恢复，确定受体鼠造血功能重建情况
2、及Rgl促进造血恢复情况；造血祖细胞混合性集落(CFU-Mix)培养，细胞周期分析和衰老相关B-半乳糖昔酶(SA-3-Gal)染色分析Sca-1+HSC/HPC衰老的生物学特点及Rgl体内调控Sca-1+HSC/HPC衰老的作用。结果：雌性受体鼠重建造血细胞来源于雄性供体鼠；连续移植后受体鼠30d存活率明显降低，外周血象恢复延缓，Sca-1+HSC/HPC出现细胞衰老特征：G0/G1期细胞比例及SA-B-Gal染色阳性率增高，CFU-Mix数量下降。与同代衰老模型组相比，Rgl治疗衰老组及Rgl延缓衰老组受体鼠30d存活率,WBC,HCT,PLT增高,Sca-l+HS
3、C/HPCG0/G1期细胞比例、SA-3-Gal染色阳性率下降，CFU-Mix数量升高。Rgl延缓衰老组变化较Rgl治疗衰老组明显。结论：人参皂昔Rgl在HSC/HPC连续移植过程中具有延缓和治疗Sca-1+HSC/HPC衰老的作用。Rgl延缓衰老作用优于Rgl治疗衰老作用。关键词人参皂昔Rgl；造血干/祖细胞；抗衰老；连续移植收稿日期2012-12-25基金项目国家自然科学基金项目(30973818,81202785,30970872)；重庆市科委自然科学基金重点项目(CSTC,2009BA5038)通信作者*王亚平，教授，博士生导师，Tel:(023)684859
4、68,E-mail：ypwangcq@yahoo.com作者简介周坍，副教授，E-mail:zhouyue_120@sina.com人参具有抗衰老、抗氧化、促进细胞增殖与分化等功能，人参皂昔单体Rgl(ginsenosideRgl)是其抗衰老的有效药理成分[1-3]o本研究运用Sca-1+HSC/HPC连续移植实验构建Sca-1+HSC/HPC衰老体内模型，将Rgl作用于该模型，研究Rgl是否具有抗Sca-1+HSC/HPC衰老的作用。结果表明Rgl能增强Sca-1+HSC/HPC自我更新及多向分化潜能，Rgl在体内具有较好的抗Sca-1+HSC/HPC衰老的作用，其
5、调控机制有待进一步深入研究。1材料1.1动物清洁级C57BL/6小鼠，6〜8周龄，雌雄均有,体重20〜25g,由重庆市医学实验动物中心提供，动物合格证号SCXK（渝）2007-0001o1.2试剂人参皂昔单体Rgl（吉林宏久生物科技有限公司，纯度＞95%）；IMDM、胎牛血清、马血清（Gibco公司）；Anti-Sca~l+MicroBeadKit（M订tenyi公司）；SA-3-galStainingKit（CellSignaling公司）；L-谷氨酰胺、甲基纤维素（Sigma公司）；rhGM-CSF,rhEPO（麒麟鲍鹏生物药业有限公司）；PCR引物（Invitr
6、ogen公司）；sybrgreenI（Biorad公司）；荧光定量PCR试剂盒（TaKaRa公司）。2方法1.1雄鼠Sca-1+HSC/HPC分离纯化及鉴定按本室方法用免疫磁性分选法分离Sca-1+细胞［4］。收集分选前标记的单个核细胞（MNC）及分选后Sca-1+细胞，流式细胞术检测分选细胞纯度，台盼蓝染色检测细胞的存活率。2.2雌性受体鼠造血衰竭模型制备及分组雌性受体鼠20只置于面积为15cmX15cm特制有机玻璃照射盒中，给予60CoV线全身一次性致死剂量（8.5Gy）照射，照射距离75cm,剂量率57.28cGy-min-lo实验分组：①空白对照组：不做任何处
7、理；②照射对照组：照射后4〜6h,经尾静脉输注无菌PBS0.2mL；③衰老模型组：照射后4〜6h,经尾静脉移植雄性供体鼠Sca-1+HSC/HPC悬液0.2mL,含Sca-1+HSPC2X104个；④Rgl治疗衰老组：照射后移植移植组等量Sca-1+HSC/HPC,移植后给予Rgl每只20mg•kg-1•d-1,30d；⑤Rgl延缓衰老组：照射前给予Rgl每只20mg•kg-1•d-1,10d,照射后处理同Rgl抗衰老组。移植后30d从第1代受体鼠骨髓细胞中分离纯化供体Sca-1+HSC/HPC,用同样方法输注入第2代雌性受体鼠体内，连续移植3代，各
