地衣芽孢杆菌dif序列的功能鉴定

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1、江南大学硕士学位论文1．1．2．2地衣芽孢杆菌用于农业病害研究地衣芽孢杆菌能产生多种抗菌物质，对一些植物病原菌有较好的抑制作用。因此，将地衣芽孢杆菌的抗菌物质开发为生物农药，成为当前研究的热点。将地衣芽孢杆菌应用于植物病害防治的研究，从20世纪80年代开始已经起步，目前国内外关于地衣芽孢杆菌应用于植物病害防治的研究较多，多篇报道均指出地衣芽孢杆菌对植物的真菌性病害有较好的抑制效果。方敦煌等【4】分离出了对植物黑胫病菌有较好抑制效果的地衣芽孢杆菌GPl3，对该菌进行了生物测定和田间小区试验，并通过大田试验示范表明

2、，地衣芽孢杆菌GPl3的防效稳定保持在50％--60％。Ahmed等”】通过试验发现，地衣芽孢杆菌可增强能抑制辣椒根腐病的角素(Sigma)活性，由此表明，地衣芽孢杆菌对某些药剂具有一定增效作用，但是具体起增效作用的物质及其机理还有待进一步研究。1．1．2．3地衣芽孢杆菌用于饲料加工研究目前国内外研究结果显示，地衣芽孢杆菌有很强的生命活力，具备产生多种酶的能力，且具有耐高温、耐酸碱等特性，在饲料加工过程对其造成的损失较小。近年来，对于地衣芽孢杆菌在饲料工业中的应用研究成果也有较多报道。周振峰[61研究发现，在奶

3、牛饲料中添加地衣芽孢杆菌制剂可增强奶牛抵抗热应激的能力，并能起到防病、抗病的作用。还有一些报道指出，地衣芽孢杆菌可以分泌高活性的胞外酶系，将水体中的有机残余物迅速降解为无机物，能够有效地促进养殖水体的生态良性循环。因此，将地衣芽孢杆菌做为鱼饲料添加剂，不仅可以促进鱼体的生长，而且有益于养殖水体的保护【7J。1．1．2．4地衣芽孢杆菌用于环境污染防治研究丁海涮8】等在拟除虫菊酯类农药残留降解菌筛选试验中发现，筛选获得的地衣芽孢杆菌qw5所产生的特异性酶，能与氰戊菊酯羧酸酯键断裂的相应产物发生作用，加速其降解。田间

4、试验结果表明，qws菌对于田间拟除虫菊酯的残留，5天内的降解率可达90％以上，效果好于实验室摇瓶培养降解拟除虫菊酯的效果。周鸣191研究利用地衣芽孢杆菌死菌体吸附废水中的铬离子，其研究结果与报道的同类研究相比发现，地衣芽孢杆菌死菌体对铬离子具有更好的吸附效果，在优化的条件下，即温度为50"C，溶液pH值2．5，菌体浓度lg／L，铬离子起始浓度300mg／L，摇床转速140r／min，吸附时间2h，得到菌体对铬离子的最大吸附量60．5mg／g。1．13地衣芽孢杆菌的应用前景地衣芽孢杆菌在医药中的应用的研究较为成熟

5、，已经形成了较完整的生产工艺。但是在农作物病害防治、饲料加工、环境污染治理等方面的应用研究，还只是处于起步阶段，具有相当广阔的发展空间。把分子生物学技术应用于地衣芽孢杆菌的研究已经成为热点，目前对于地衣芽孢杆菌基因组的认识还比较有限，其基因的克隆也很少【2l。据文献报道，所克隆的基因主要是一些酶基因，如牛丹丹等从地衣芽孢杆菌中克隆了耐高温Ⅱ．淀粉酶基因，马骏双等克隆T13．甘露聚糖酶基因，梁斌等克隆了角蛋白酶基因kerB等，而关于地衣芽孢杆菌其他2第一章前言基因的克隆就更少了。克隆地衣芽孢杆菌的抗菌物质基因应用

6、于抗病育种的研究，将成为防治植物病害的另一条有效的途径。目前，虽然已经有地衣芽孢杆菌高产蛋白酶工程菌的报道，但其稳定性较差，具体原因还有待进一步的研究。因此，对地衣芽孢杆菌基因组进行功能鉴定和遗传改造方面的研究有着及其重要的意义。传统的诱变及筛选是最常用的菌种遗传改造手段，但存在工作量大，效率低，遗传稳定性差等缺点。随着生物化学、细胞生物学、分子生物学和遗传工程的发展，能够定向操纵遗传变化的基因删除技术成为菌种遗传改造中最具潜力的技术。1．2基因删除技术基因删除技术是20世纪80年代发展起来的一项重要的分子生物

7、学技术，是利用基因转移方法将外源DNA序列导入目的细胞后，通过外源DNA序列与目的细胞内染色体上同源DNA序列间的重组，外源DNA定点整合入目的细胞基因组上某一确定的位点，或对某一预先确定的目标位点进行定点突变，从而改变细胞遗传特性的方法Il0。。利用基因删除技术可阻断细胞的代谢旁路，或通过引入突变位点而改变目的产物的产量或质量，达到微生物育种的目的。作为一项新兴的技术，基因删除有着无可比拟的优点，其优势在于能够以精确、高效、简单、快速的方式完成传统DNA重组技术无法做到的复杂基因操作。基因删除操作所适用的细胞

8、既可以是原核细胞，也可以是真核细胞。基因删除技术通过对生物活体遗传信息的定向修饰(包括基因灭活、缺失突变、点突变引入、外源基因定位引入和染色体组大片段删除等)，并使修饰后的遗传信息能够在生物或体内稳定遗传，表达突变后的性状，因而这项技术被用于研究基因功能等生命科学的重大课题，也为相关的疾病治疗和新药筛选评价模型提供了新的技术手段。1．2．1基因删除技术的原理同源重组是基因删除操作技术的