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1、GB/T5413.17-1997前言本标准给出两种方法，方法一是微生物法，为等效采用美国公职分析化学师协会(AOAC)的方法，虽然操作步孩策杂，但测定结果准确度高。方法二是高压液相色谱法，是经实验确定的一种快速、准确的方法。本标准方法一为仲裁法。本系列标准从实施之日起，代替GB5413-85,本标准由中国轻工总会提出。本标准由全国乳品标准化中心归口。本标准负资起草单位:国家乳制品质量监晋检验中心。本标准参加起草单世:卫生都食品卫生监督检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公可、雀集(申国)投赞服务有限公司。·本标准主要起草人:张玉杰、王芸、殷晓
2、红、杨金宝、吕为群。中华人民共和国国家标准婴幼儿配方食品和乳粉Ga/T5413.17-1997泛酸的测定代替GB5413-85Milkpowderandformulafoodsforinfantandyoungchildren-Determinationofpantotheaieacid1范圈本标准规定了用微生物法和高压液相色谱法测定泛酸的方法。本标准方法一适用于要幼儿配方食品和乳粉中泛酸的测定，方法二适用于乳粉中泛酸的测定。方法一徽生物法2方法原理利用植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)的萦殖量与样品中的泛酸含量成正比的关系可计
3、算出样品中的泛酸含量。3试荆、翻种和培养签所有试剂，如未注明规格，均指分析纯;所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。3.1生理盐水:9g抓化钠溶于1000mL容量瓶中.3.2泛酸钙:标准品。3.3乙酸;c(HAc)为0.2mol/L。吸12mL冰乙酸用蒸馏水稀释至1L,3.4甲苯.3.5乙酸钠,c(NaAc)为。.2mo1/L.溶解16.4g无水乙酸钠于水中，稀释至1000mL.3.6菌种—植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum).37培养基3.7.1乳酸杆菌琼脂培养基:光解陈15g,醉母浸膏5g,葡萄糖,log，番茄汁io0m
4、L;碑酸二氢钾2g,聚lli梨搪单油酸酷1g,琼脂log，加蒸馏水至1000mL,pH6.8士0.2(250C).3.7.2乳酸杆菌肉汤培养基:光解陈15g,醉母浸膏5g,葡萄糖log，番茄汁一100mL,碑酸二氢钾2g,聚山梨糖单油酸酷1g，加燕馏水至1000mL,pH6.8士0.2(25'C).3.7.3泛酸测定用培养荃:葡萄糖40g，乙酸钠20g，无维生素酸水解酪蛋白log,磷酸氢二钾1g,磷酸二氢钾1g,L-脱氨酸。.4g,L一色氮酸。.1g,硫酸镁。.4g,氯化钠20mg,硫酸亚铁20mg,硫酸锰20mg，硫酸腺嗓岭20mg,盐酸鸟嚎P令20
5、mg,尿啼吮20mg,胡萝卜素400fag，盐酸硫胺素Mpg,生物素0.81+g,p-氨荃苯甲酸200pg，烟酸lmg,盐酸毗哆醉800kg,聚山梨糖单油酸醋0.1g,加燕馏水至1000mL,pH6.7士0.1(25C).国家技术监怪局1997一05一28批准1998一09一01实施Gs/T5413.17-19974仪器常用实验室仪器及分光光度计。5制备5.1菌种的制备5.1.1将保存在直柱状固体培养基中的植物乳杆菌接种到新的乳酸杆菌琼脂培养基中，培养后再继代培养一次，然后将其转接到乳酸杆菌肉汤培养基中培养后备用。5.1.2将5.1.1中的菌悬液以20
6、00r/min离心2^-3min，倾出上清液，加入lOmL生理盐水(3.1)>搅匀，再离心2-3min,如此清洗3次，吸1.Oml，该菌悬掖于lOmL生理盐水(3.l中。5.1.3用721型分光光度计，于550nm波长下，以生理盐水(3.1)做对照，测5.1.2菌悬液的浊度值，此值应在600o-80%之间。5.2标准溶液的制备5.2.，泛酸标准贮备液。浓度40pg/mL,精确称取45-55mg泛酸钙标准品(3.2),溶入500mL蒸馏水中，加lOmL乙酸(3.3)，加lOOmL乙酸钠(3.5)，用水稀释至泛酸钙精确浓度为43.47pg/mL(即泛酸浓度
7、为40pg/mL)，加甲苯(3-4)贮于冰箱中。5.2.2泛酸中间贮备液:浓度1pg/mL,取25mL标准贮备液(5.2.1)，加入大约500mL燕馏水，乙酸lOmL(3.3)，乙酸钠l00mL(3.5)，再用水稀释至1L。加甲苯(3-4)贮于冰箱中。5.2.3泛酸标准工作液:高浓度的为lOng/mL，低浓度的为5ng/mL,吸5.OmL中间贮备液(5.2.2)，用燕馏水稀至500.OmL。每次测定前制备。吸5.OmL中间贮备液(5.2.2)，用燕馏水稀至1000mL。每次测定前制备。6测定61样品的处理称取一定量的样品，加入lOmL缓冲液(称24.2
8、gTrizmaBase溶入200mL水中即可)，再加足量的水，121℃水解15mih,冷却，调
