eraf17基因在黄瓜雌花分化中作用

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1、摘要ERAFl7基因是通过基因RNA表达谱的差显技术得到的黄瓜中，控制植物花器发育的MADS-bOX基因家族的一个基因。ERAFl7基因在黄瓜的雌雄生殖器官的表达不同，可以由乙烯(或者能释放乙烯的物质)诱导表达，从而推动雌性化，但是它的作用机制却不清楚，并没有明确的证据表明ERAFl7基因与雌花的发育有直接关系，所以本论文研究重点在于证明乙烯诱导ERAFl7基因的表达对黄瓜雌花的分化有确定的正相关，从而可以探索黄瓜雌性器官发育存在的可能的信号通路，并对应用前景进行评估。本论文研究通过提取植物总RNA和RT-PCR克隆得到黄瓜ERAFl7基因，利用PCR、限制性酶切、连接和农杆菌转化技术，得到

2、转化了ERAFl7基因和ERAFl7基因沉默序列(发卡结构)的农杆菌EHAl05，用于黄瓜的转化。通过农杆菌侵染、再生体系和卡那霉素作为筛选剂的筛选体系，得到了基因组中整合两种序列的转化苗，在DNA和RNA水平上进行了鉴定，并且发现转化的植株在表型上发生了相应的变化，正常的栽培种黄瓜植株在低节位生雄花，高节位生成雌花，而转化了发卡结构的植株发生了预期的沉默，所有节位上只生成雄花，没有生成雌花，而转化了ERAFl7基因的植株也只生成雄花，没有生成雌花。从这些证据证明ERAFl7基因的表达确实在黄瓜雌花的分化中起到了重要作用。另外采用原核表达的方法表达了ERAFl7基因的融合蛋白，免疫小鼠得到多

3、克隆抗体，用于转基因植物的检测。关键词：ERAFl7基因，性别分化，RNAi，黄瓜组织培养与转化AbstractERAFl7gene，akindofplantMADS—boxgenecontrollingflowerdevelopment，isisolatedfromcucumberbydifferentialdisplayofRNAexpression．ERAFl7geneexpressesdifferentlybetweenmaleandfemalereproductiveorgans．Itsexpressionisinducedbyethyleneorethylenereleasedc

4、ompoundsthatCanpromotefemaleness．NoevidencedirectlyshowstherelationshipbetweenERAFl7geneandfemaleness，however．SothisworkfocusonprovingthepositivecorrelationbetweentheexpressionofERAFl7geneinducedbyethyleneanddevelopmentoffemaleflowers，thensearchforthesignalpathwayofcucumberfemalereproductiveorgande

5、velopment．InthisworkthecucumberERAFl7genefragmentWasisolatedviaplanttotalRNAextractionandRT-PCR．UsingPCR，enzymedigestion，ligationandbacteriumtransformationthevectorexpressERAF／7andsilenceERAF／7(hairpinstructure)wereconstructedintoAgrobecterium(ERA105)whichwereusedforcucumbertransformation．Afterinfe

6、ction，regenerationandKanamycinselection，twoseriesoftransformantswereyielded．WefoundthatthephenotypeofthemWaschangedcorrespondingly．Normalcucumbergeneratesmalefloweratlowernodeandfemalefloweratahighernodeposition．ThetransformantswithinhairpinDNAresultedsilenceasexpected，generatingmaleflowersonallthe

7、nodepositions．MaleflowerswerealsoonlygeneratedatallthenodepositionsintransformantswithoverexpressionofERAFl7genebutriofemaleflowers．ThissuggestedthatthemainreasonmaybeduetoCO—suppressionofERAFILTheproofsabo