鸭源呼肠孤病毒的分离与鉴定

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1、鸭源呼肠孤病毒的分离与鉴定摘要禽呼肠孤病毒感染在多种鸟类体内普遍存在，能引起鸡、番鸭、鸭感染疾病，而且，禽呼肠孤病毒的感染流行日益加剧，临床疾病形式不断多样化，这些给各国禽养殖业带来严重的经济损失。2006年以来湖北省一些肉鸭场均出现一种以脾脏有大量白色坏死斑块为特征的急性传染病，患病率为100％，死亡率达40％。本研究通过自然发病鸭流行病学调查、临床症状、病毒分离纯化、理化特性、血清中和试验、动物回归试验和分子生物学方法证明该病病原为呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属鸭源禽呼肠孤病毒。本研究观察记录了自然感染鸭的临床症状和病理学变化。

2、病鸭临床表现为腹泻，流泪，生长缓慢，剖检可见脾脏表面分布着白色或黄白色，大小不一的圆形病灶，肝脏肿大，表面呈白色网格状。病理组织学检查显示，脾脏内可见多个坏死灶，灶内细胞坏死，坏死灶周围结缔组织增生，有大量吞噬含铁血黄素的巨噬细胞。肝细胞变性，细胞核消失溶解。对病鸭脾脏的透射电镜观察结果显示，脾脏内有大量嗜酸性粒细胞和巨噬细胞。取病鸭的肝、脾组织，经尿囊腔接种樱桃谷鸭胚后，分离到一株病毒，该病毒的鸭胚半数致死量ELD50为10弓·75，0．2ml。此外，该病毒能引起鸭胚成纤维细胞病变，半数感染量TCID50为104～，O．1ml

3、。经鸭胚中和试验显示，该株病毒能被禽呼肠孤病毒阳性血清所中和。该病毒病原特性、理化特性和致病性检测结果显示，病毒呈圆形，直径约为70nm，无囊膜，双层衣壳结构。对乙醚不敏感，对热有抵抗力，经65℃lh处理，病毒活性没有降低，对PH3酸性环境有抵抗力，对鸡红细胞没有血凝性。根据番鸭呼肠孤病毒S2基因设计引物，通过RT-PCR方法，测定了该病毒的S2基因序列，全长为1123bp，与鸭源呼肠孤病毒同源性为97％，与番鸭呼肠孤病毒同源性为93％。上述结果表明，引起以脾坏死为主要特征的鸭传染病病原是呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属禽呼肠孤病毒。

4、关键词：禽呼肠孤病毒；分离与鉴定；血清中和试验；电镜负染；RT-PCR华中农业大学2009届硕士学位论文AbstractAvianreovlrusexistsinmanykindsofbirds．Chickens、Muscovyducksandducksinfectedbyavianreoviruswouldbewithdisease．While，diseaseinducedbyavianreoviruswasdiversificationandanabatic．Soeconomiclosscasedbyavianreoviru

5、s，aredamagingaviancultura．1industryinmanycountry．In2006，therehadbeenanewacuteinfectiousdiseaseinsomeducknurseriesinHubeiprovince．Thereweremanywhitenecroticlesionsonthespleenofduckinfected．Morbidityratewas100％andmortalityratewas40％．Throughserumneutralizationtest，RT-PC

6、RandSOon，thisresearchcertifiedthatpathogenwasavianreovirus．Clinicalsymptomandpathologicalchangewereobserved．Infectedduckshadphenomenonofdiarrheaanddacryorrhea．Afterdissectingdeadducks，thereweremanywhiteplaquesinthesurfaceofspleenofdeadduck．Andliverbecamewhiteandretic

7、ulate．Theresultofhistopathologicexaminationwasasbelow：Thereweresomefocusesofnecrosisinspleen．Cellularnecrosistookplaceinthefocuses．Andheterophilegranulocytesinfiltratedinthefocusofthespleen．Nucleolusofhepatocytebecamedisappeared．Thereweremanyeosinophilegranulocytesan

8、dmacrophagesinthespleen，whichobservedbytransmissionelectronmicroscope．Whenduckembryowasinoculatedthroughallantoiccavity，onestrainof