线粒体dna损伤修复系统介导的口腔鳞癌细胞凋亡研究

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1、佳木斯大学硕士论文中文摘要目的：研究丫射线对口腔鳞状细胞癌细胞线粒体DNA损伤修复系统相关基因Tfam、OGGl和POLG表达的影响，并通过抑制线粒体DNA损伤修复系统而增加1r射线不敏感的口腔鳞状细胞癌细胞的凋亡。方法：体外培养OSC．2和OSC．5细胞，并用丫射线处理，MTr比色法和流式细胞仪检测口腔鳞状细胞癌细胞存活率，气相色谱／质谱(C,C／MS)法测定细胞核与线粒体中8．羟基脱氧鸟苷(g-OHdG)的含量，DNA聚合酶链反应检测mONA基因位点的缺失，RNA干涉技术敲除相关基因，半定量逆转录PCR检测相关mRNA的表达水平，WesternBlot检测相关蛋白的

2、表达。结果：经过30Gy丫射线处理后OSC-2和OSC．5细胞的存活率分别为(35．33±6．03)％和(75．674-4．16)％；nDNA和mONA中8-OHdG的含量增加口

3、2)和Akt的抑制剂(AktInhibitorVI)处理的细胞中，TfammRNA、OGGl和POLG蛋白表达水平都被下调。在OSC．5细胞株上单独使用Y射线并不会诱导mONA的缺失，但是经过T射线和PI．3K或Akt抑制剂预处理后mONA有缺失。另外，LY294002或InhibitorVI处理后能使细胞TfammRNA的含量、OGGl和POLG蛋白表达减少而8．OHdG合成增加，细胞的凋亡也增加。Tfam、OGGl和POLG各自的siRNA都下调了相应的蛋白表达水平(P<0．05)。siRNAs转染的细胞经30Gy丫射线处理后凋亡数量有所增加。结论：丫射线能上调射线

4、非敏感的OSC．5细胞中Tfam、POLG和OGGl的表达。Tfam、POLG和oGGl表达水平的上调与PI．3K／Akt信号转导通路的激活有关。此外，通过抑制口腔鳞状细胞癌细胞mONA损伤修复系统能增加对Y射线不敏感的OSC细胞的凋亡。关键词：口腔鳞状细胞癌，线粒体DNA，线粒体转录因子，8．羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶，DNA聚合酶7．IIii,I_．_mmIII：IIIII：i,．蔓．1．佳木斯大学硕士论文{IIa'1=Ii'II．．．．iiiiiiiAbstractObjective：ToinvestigatetheexpressionofTfam，eGGlandPO

5、LC与whicharerelativetomitoehondrialDNArepairsystem，regulatedbyYirradiationinoralsquamouscellcarcino-macells．Andenhanceapoptoticdamageofy-raysinsensitivesquamouscellcarcinomacellsbyir衄bitingthemitoehondfialDNArepairsystem．．Methods：OSC一2andOSC一5cellswereculturedinvila'oandtreated、析nl7irradi

6、ation．OSCcellssurvivalratewascalculated、Ⅳi也M[TTassayandFlowCytometry．UsingGC／MSdeterminedthelevelsof8-OHdGinnucleolusandmitoehondria．UsingPCRdetectedthemRNAlevelof△】mtDNA．UsingWesternblo毫’RNAinterference，RT-PCRdetectedtheproteinandmRNAlevelofmRNA,Tfam,OGG1andPOLG：Results：After0SC-2cellsa

7、ndOSC一5cellswereirradiatedatadoseof30Gy,thecellproliferationratewere(35．33±6．03)％and(75．67±4．16)％respectively,thelevelsof8-OHdGandAmtDNAinnDNAandmtDNAincreased(P<0．05)，thelevelofTfammRNAincreasedtoo，buthigherTfammRNAlevelswereobservedinOSC·5cellsat6hafterirradiation．Besid