滑菇w01胞外与胞内多糖的提取与其抗氧化活性

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1、山东农业大学硕士学位论文中文摘要滑菇(PholiotanamekoW-01)，属于担子菌亚门(Basidiomycotina)，伞菌日(Agaricales)，丝膜菌科(Strophariaceae)，鳞伞属(Pholiota)，是一种冬、春季发生的菌盖粘滑的木腐菌，为人工主要栽培的食用菌之一。富含多糖、蛋白质、微量元素、维生素等多种生物活性物质，滑菇多糖具有抗衰老、增强免疫力、抗肿瘤、抗菌等多种药理作用。本课题以滑菇W-01为出发菌株，采用Plackett-Burman(PB)试验和响应面(res

2、ponsesurfacemethodology,RSM)试验等方法优化了滑菇胞外多糖(exopolysaccharide，EPS)和胞内多糖(intracellularpolysaccharide，IPS)的提取条件，并对EPS和IPS进行了体外和体内抗氧化活性的检测。得到以下结论：(1)EPS的最佳提取条件通过PB试验，EPS的提取条件为pH值9，浓缩倍数3倍，浓缩温度60．C，乙醇倍数4，乙醇浓度75％，醇沉温度4．C和醇沉时间12h，EPS提取量达到1904．60meCL。通过响应面试验，EP

3、S最佳提取条件为pH值8．8，浓缩倍数1．02倍，乙醇浓度90．31％。在此条件下，EPS的提取量理论值达至1J3959．35mg／L。考虑到操作的方便性，将最佳提取条件调整为：pH8．8、浓缩倍数1．0、乙醇浓度90．0％。在此条件下，EPS的提取量理论值为3935．57mg／L，实际值为3933．02mg／L。‘(2)口S的最佳提取条件通过PB试验，IPS的提取条件为固液比20：1，pH9．0，超声波功率400W，超声波时间800s，提取温度90。C，提取时间1h，提取次数3，乙醇浓度95％，乙

4、醇倍数4，醇沉温度．4。C，醇沉时间12h，IPS提取率为2．85％。通过响应面试验，IPS最佳提取条件为固液比20．31：1，超声波时间623．01s，提取次数2．87。在此条件下，IPS的提取率理论值达到3．919％。考虑到操作的方便性，将最佳提取条件调整为：固液比20：1，超声波时间623s，提取次数3。在此条件下，IPS的提取率理论值为3．919％，实际值为3．92％。(3)EPS、IPS的体外抗氧化活性’用普鲁士蓝法测定还原力，并对羟基自由基、超氧阴离子自由基、DPPH的清除能力进行了检测

5、。结果表明，EPS和IPS具有一定的还原血，并有明显抑制·OH、02。和DPPH滑菇W-OI胞外与胞内多糖的提取及其抗氧化活性自由基的作用，呈现量效关系。：EPS在500mg／L时，还原力为0．53，比对照BHT高6％，对·OH、02-·和DPPH自由基的清除率分别为45．23％、58．37％和52．55％，分别比BHT高6．88％、2．31％和4．81％。EPS对·OH、02‘·和DPPH自由基的半数抑制浓度(ECso)分别为536．13mg／L、388．ogmg几和435．54mg／L。IPS在

6、500mg／L时，还原力为0．59，比对照BHT高18％，对·OH、02-·和DPPH自由基的清除率分别为53．11％、63．24％和59．33％，分别比BHT高24．91％、10．85％和18．33％。IPS对·OH、02‘·和DPPH自由基的半数抑制浓度(EC50)分别为421．83mg／L、322．39m／L和392．37mg／L。(4)EPS、IPS的体内抗氧化活性通过测定小鼠血液、心、肝、脾、肾组织中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathioneperoxidsadc，GSH-Px)、超氧化物

7、歧化酶(superoxidedismutase，SOD)、谷丙转氨酶(alaninetrasaminasc，√邺)、过氧化氢酶(catalasc，CAT)的活性和脂质过氧化物丙二醛(mMondialdehydc，MDA)含量，检测EPS、IPS对血液及各组织抗氧化的能力。结果表明，EPS、IPS能提高小鼠血液及组织中GSH．．PX、SOD、ALT和CAT的活性，降低MDA的含量，表明EPS、IPS通过调节氧化酶的活性，清除自由基及抑制脂质过氧化作用，提高机体的抗氧化能力。随着浓度的增加，小鼠血液和各

8、组织中的抗氧化酶活性增高。灌胃相同浓度的多糖溶液时，IPS组中GSH-Px、SOD、ALT和CAT活性高于EPS组(尸>0．05)，MDA含量低于EPS组(，

9、>O．05)。(5)滑菇EPS、IPS分离纯化EPS经过DEAE-Cellulose柱层析分离，得到两个组分：EPS．1、EPS．2。经Sephadex(3-100柱层析分离EPS-2，得到3个组分：EPS一2a、EPS一2b、EPS一2c。IPS经过DEAE．Cellulose柱层析分离，得到四个组分：IPS