尼古丁对大鼠中脑α-7型神经烟碱胆碱能受体表达影响

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1、中自匪翁罕台矗篓筘箕掌一羹；蕊爿函翮烈薹誓圳q√鍪鬻髫i声豢萋芷1∽已酣释谤囊蕊掣蘩增辇荽影匪露季。；擎赤钙符蕉娶嚣缝季蓦罐藤孵蜒；签篙≤疆褥；端篓囊基珥渲鏊第萱Ⅳ霉一童笋PpF黔租&荔鼋冬g薹雾￡垂囊型善；i!；；j摧臻攀霞攀骥蟛翻雾蠹渖i雾妻棼骛孽唧霎嗡茬竖蘩誊雾墨鬻基鞘“墓蓬羹三三降錾§霉舞亭9；采旃；霉嘲喇萋蔫型篓艘寰霉两弓萋垡蒜薹耄瓤孽羹羹曼i谌一囊霪堕菪列攀0i露馏塌焉囊鬟。萝亦耋个令卺翌蓄型霎辩焉善善善薹薹霎i塾誊耄耋姜耋亨鎏薹≥囊季蓄毳；孽蓼雾冀i；茬愕莲囊赶挈羹羞霄瘥星薹羹殛前篓一藉篓刚野霎鬻P=j1娶葛譬解墓篓雨夭萋霪誉鬻雪篓。雾}曼．鬻蹦

2、受墼艇

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4、低下、低智商以及行为异常等。在世界各国，每年因吸烟引起的死亡人数占全部死亡人数的20％，吸烟所致死亡占死因分析的首位。烟草已成为人类一大公害。尽管人们都知道吸烟有很多危害，然而人们还是持续吸食难以戒掉，这是由于烟草中含有尼古丁，尼古丁是导致吸烟成瘾的主要生物碱。学者们一直在探索尼古丁致瘾机制，试图搞清致瘾通路，寻找切入点，为戒烟提供有效的方法。目前认为，尼古丁主要通过中脑皮质边缘和黑质一纹状体多巴胺能通路产生成瘾作用。在中脑皮质边缘系统中，神经元胞体位于腹侧被盖区(VTA)，尼古丁通过对胞体上神经烟碱胆碱能受体的作用，使下游伏隔核的多巴胺释放增加，从而使人感到

5、愉快并为之形成癖好。这种愉快感和癖好的形成驱动了成瘾过程，其机制对毒品滥用和犒赏行为的加强都起到了重要的作用。此外，在黑质一纹状体多巴胺能通路中，神经元胞体位于黑质区(SN)，尼古丁能增加多巴胺在纹状体尾状核和豆状核区域的释放。在哺乳动物脑内，尼古丁通过“一7型神经烟碱胆碱能受体(or．一7nAChRs)来发挥作用，该受体与尼古丁具有高亲和性，尼古丁与之作用后，导致离子通道开放，受体构型改变，使钙离子内流，从而改变神经元的功能，所以仪一7nAChRs被认为是与尼古丁作用的主要受体。迄今为止，尼古丁对大鼠中脑d一7nAChRs的调节机制还不能解释清楚。本研究应用

6、原位杂交、免疫组织化学和western—blot技术，从模型鼠脑和模式细胞人手，在转录和翻译水平研究尼古丁对大鼠中脑d一7nAChRs蛋白质和mRNA表达及分布的影响，进一步探索尼古丁致瘾作用的机理。方法1．建立大鼠急性暴露尼古丁的动物模型。将大鼠随机分成二个实验组和一个对照组，每组10只。实验组每日8：30分别皮下注射尼古丁0．4mg／kg．d，30．0mg／kg．d，每天一次，连续七天；对照组在同一时间皮下注射同等体积的生理盐水。最后一次注射后12小时进行心脏灌流，获取固定的脑组织。2．尼氏染色定位各脑区。，3．免疫组织化学染色观察大鼠脑0／．一7nACh

7、Rs表达量，并进行统计学分析。4．原位杂交实验检测大鼠脑仅一7nAChRmRNA的表达量，并进行统计学分析。5．PCI2细胞传代培养。PCI2细胞接种于RIPM1640培养液中，培养液中加入NGF(50ng／m1)诱导PCI2细胞分化。6．Western—blot实验检测尼古丁对PCI2细胞仅一7nAChRs的影响。NGF诱导和无NGF诱导的PCI2细胞各分为四组，设为对照组，三个实验组(10tzM尼古丁24h；1001xM尼古丁24h；100tzM尼古丁48h)。结果一．建立了大鼠急性暴露尼古丁的动物模型Wistar雄性大鼠，体重180—200克，对照组与2

8、个实验组各10只，分笼单独喂养。实验组大鼠注射尼古丁后状态良好，2只高剂量组的大鼠分别在第二天和第五天死亡。二．尼氏染色定位大鼠各脑区三．免疫组织化学染色及统计分析结果在实验组大脑皮质内，神经细胞的咀一7nAChRs染色强度高于对照组，Ot一7nAChRs表达在实验组和对照组的差异有统计学意义(P<0．05)，VTA和SN区的差异无统计学意义(P>0．05)。四．原位杂交法染色及统计分析结果．2．实验组VTA和SN区的神经细胞fi一7nAChRs染色强度高于对照组，仅一7nAChRmRNA表达在实验组和对照组的差异有统计学意义(P<0．05)，大脑皮质区的差异

9、无统计学意义(P>0．05)。五．PC