牛巴贝斯虫流行病学初步调查及体外培养研究

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1、新疆农业大学硕士学位论文牛巴贝斯虫流行病学初步调查及体外培养研究姓名：吕伟申请学位级别：硕士专业：临床兽医学指导教师：简子健20090601牛巴贝斯虫流行病学初步调查及体外培养研究摘要巴贝斯虫病(Babesiosis)原被称焦虫病或血孢子虫病，是蜱传播的一类人畜共患血液原虫病的总称。而牛巴贝斯虫病(Babesiosisbovum)是世界各国公认的危害养牛业最重要的寄生虫病之一。1980年，Levy等建立了微气静相培养技术，实现了牛巴贝斯虫体外连续培养并得到了理想的效果。之后，该方法被迅速应用于双芽巴贝斯虫、犬巴贝斯虫、马巴贝斯虫

2、等多种巴贝斯虫的体外培养均获得成功。目前，该方法被研究者用于巴贝斯虫病的病原分离和检测、免疫诊断、免疫监控、抗原成分分析、药物筛选、虫种保存等。因此，该技术被誉为巴贝斯虫研究史上的里程碑。新疆本地的牛巴贝斯虫能否进行体外培养尚未研究，本研究旨在尝试和摸索牛巴贝斯虫体外培养的方法和条件，并对其流行病学做一初步调查。本研究工作主要包括以下三部分：1克拉玛依地区牛梨形虫病流行病学调查传播牛梨形虫病的蜱有三种：全沟硬蜱、璃眼硬蜱和草原革蜱。本病多为混合感染，有明显的季节性。发病季节从5月份_刀：始，6月中旬达到高峰，7月中旬后基本无发病

3、，9月份有一次发病高峰，之后便再无发病。2牛巴贝斯虫PCR检测本试验通过PCR方法检测出牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫、环形泰勒虫的混合感染，并从样本中筛选出牛巴贝斯虫单一感染的样本进行体外培养的研究。3牛巴贝斯虫体外培养研究试验结果表明，新鲜血液中的虫体在含40％牛血清的完全培养液和37*(2、5％C02的条件下能建立起牛巴贝斯虫的体外培养，虫体可以连续培养14天，传代13次，最高染虫率可以达到12．5％，平均染虫率为4％。对牛巴贝斯虫体外培养的几种影响因素进行比较，结果表明：培养液的pH值明显影响虫体的生长繁殖，最适体外培养的pH

4、为7．0～7．2；合适的血清浓度是40％；灭活血清支持牛巴贝斯虫生长的能力较未灭活血清低；脱纤血清与自然凝固的血清用于培养的效果相同；RPMI．1640和M．199培养液支持牛巴贝斯虫生长的能力无明显差异。关键词：牛巴贝斯虫；体外培养；传代；染虫率1IIStudyontheInitialEpidemiologicalInvestigationsofBabesiaBovisandtheCultivationinVitroAbstractThebabesiosisiSatick-bornezoonosisbloodprotozoia

5、sis．ThebovmebabesiosisiSreportedlytheoneoftheseverestparasitosisthatdoesharmtotheworldcattleindustry．1980，LevyandRisticestablishedmicro—gas—phasestaticculture，butalsoachievethecontinuouscultureinvitroBabesiaparasitesandhasbeenthedesiredresults。Afterthemethodwasquickl

6、yappliedtoBabesiabigemina,Babesiacnnis。Babesiaequi,etc．havebeensuccessfullyculturedinvitro．Atpresent，themethodresearchersusedbabesiosisseparationanddetectionofthepathogen，theimmunediagnosis，immunesurveillance，antigencomponentanalysis，drugscreening，helminthpreservatio

7、n．Therefore，thetechnologyknownasBabesiaresearchmilestoneinthehistory．Xinjiang，localBabesiabovishasnotyetbeenabletocultivateinvitrostudies，thisstudywastrytoexplorethemethodsandconditionsofthecultivationofBabesiabovisinvitro．Andmakeapreliminaryinvestigationtoepidemiolo

8、gy．Thefollowingthreestudieswereconductedinthepresentarticle．1．Karamayregioninvestigationofpiroplasmosis．Therearethreetypesoftickssp