egf与bfgf在人牙髓干细胞增殖分化中的作用

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1、泸州医学院硕士学位论文EGF与bFGF在人牙髓干细胞增殖分化中的作用姓名：吴桂堂申请学位级别：硕士专业：口腔临床医学指导教师：刘兴容201204。EGF与bFGF在人牙髓干细胞增殖分化中的作用摘要、目的：人牙髓干细胞(humanDentalpulpStemCells，hDPSCs)和大多数干细胞一样，具有多向分化潜能，形成新的功能细胞，从而保持牙齿组织生长和衰退的动态平衡，研究发现在牙本质的发生、牙齿的发育及牙髓损伤修复过程中均存在牙髓细胞的增殖、分化及多种生长因子的表达上调。表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)、碱性成纤维生长N子(basic

2、fibroblastgrowthfactor,bFGF)在hDPSCs增殖分化中的作用在国内外报道较少，本实验在体外分别观察EGF、bFGF以及二者共同作用对hDPSCs的增殖和分化的影响，进一步探讨EGF、bFGF促进hDPSCs增殖与分化的可能机制，从而为hDPSCs移植促进牙齿的再生提供一定的实验基础与理论依据。方法：1对冻存的hDPSCs常规细胞复苏、培养24小时，分为实验组和对照组，在实验组中将生长因子EGF、bFGF按不同浓度(5、10、20、50、100ng／m1)分别加入hDPSCs培养板孔中，对照组不加任何生长因子，每组设5个复孔，4天后采用四甲基偶氮唑盐

3、(MTT)法于波长490nm测光密度(OD)值，比较不同浓度EGF、bFGF的对hDPSCs增殖的影响，确定刺激hDPSCs增殖的最大效应浓度；2取传代培养的hDPSCs，按1x104／ml浓度接种培养，24小时后换液，将最大效应浓度的生长因子加入实验组(EGF组、bFGF组、EGF+bFGF组)中，对照组(不加任何因子)，每组设5个复孔，分别在加入生长因子后的第0、1、3、5、7d，测其OD值，分析各组hDPSCs增殖的情况；3常规复苏培养冻存的hDPSCs，实验分组同上，分别将最大效应浓度的EGF、bFGF、EGF+bFGF加入各组hDPSCs培养基中并分别于I、3、5

4、、7、14天，测定hDPSCs的碱性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)活性，进一步分析EGF、bFGF、EGF+bFGF在hDPscs分化中的作用。4．统计分析实验结果采用SPSSl7．0统计软件进行处理，实验数据均以均数士标准差(i±s)表示，P<0．05表示有统计学意义。结果：1．EGF、bFGF最大有效浓度分别为：50ng／ml、20ng／ml；2．(1)在o～7天内实验组和对照组的OD值随时间延长而增大；(2)EGF组、bFGF组在加入生长因子后OD测定值在的第0、1天与对照组相比变化不明显，差异无统计学意义(P>0．05)，第3、5、7天OD

5、值显著增加，高于对照组，有统计学意义(P<0．05)；(3)EGF+bFGF组在加入生长因子后的第0、1天OD值与EGF、bFGF组及对照组相比变化不明显，差异无统计学意义(P>0．05)，加入生长因子后的第3、5、7天OD值均高于EGF、bFGF组和对照组，有统计学意义(尸O．05)，在第5、7、14天ALP活性高于对照组，有统计学差异(尸

6、尸>O．05)；(4)EGF+bFGF组在加入生长因子后的第1、3天ALP活性与EGF、bFGF组相比无明显差异(尸>0．05)，加入生长因子后的第5、7、14天ALP活性均高于EGF、bFGF组，但与EGF组无统计学意义(尸>0。05)。结论：1生长因子EGF和bFGF最大效应浓度分别为：50ng／ml、20ng／ml；2生长因子EGF能有效促进hDPSCs增殖与分化，生长因子bFGF能促进hDPSCs增殖，对hDPSCs分化作用不明显；3EGF、bFGF在促hDPSCs的增殖可能具有相互协同或叠加的作用，而在分化方面无协同作用。关键词：牙髓干细胞；表皮生长因子；碱性成纤

7、维生长因子；增殖；分化；碱性磷酸酶TheEfiectofEGFandbFGFontheProliferationandDifferentiationofHumanDentalpulpStemCellsAbstractObjective：Justlikemostofthestemcells，humandentalpulpstemcells(hDPSCs)havecapacityofmulti—potentialdifferentiation．Theycanformnewfunctionalcellstokeepthe