构树叶总黄酮对肝癌hepg-2细胞增殖和凋亡作用的研究

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1、分类号R36学校代码10601密级编号硕士研究生学位论文构树叶总黄酮对肝癌HepG-2细胞增殖和凋亡作用的研究学科专业:病理学与病理生理学研究方向:天然药物抗肿瘤研究生姓名:刘建楠学号:Y0901020学位类型科学学位导师姓名:朱开梅教授1独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得（注：如没有其他需要特别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证书使用过的材

2、料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日----------------------------------------------------------------学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解桂林医学院有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权桂林医学院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制

3、手段保存、汇编学位论文。同时授权中国学术期刊（光盘版）电子杂志社、中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》、《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：签字日期：年月日签字日期：年月日2目录中文摘要………………………………………………………………5ABSTRACT………………………………………………………………8英汉缩略词对照表……………………………………………………13前言…………

4、…………………………………………………………14第一部构树叶总黄酮药物提取制备…………………………………171实验材料与仪器……………………………………………………172实验方法………………………………………………………………173实验结果………………………………………………………………224讨论……………………………………………………………………24第二部分构树叶总黄酮对人HepG-2细胞增殖与凋亡作用的研究…261实验材料与仪器………………………………………………………262实验方法…………………

5、……………………………………………293结果……………………………………………………………………324讨论……………………………………………………………………35第三部分构树叶总黄酮对人肝癌细胞株HepG-2细胞Bax、Bcl-2表达的影响………………………………………………………………381实验材料与仪器………………………………………………………382实验方法………………………………………………………………403结果……………………………………………………………………464讨论……………………………

6、………………………………………50全文结论…………………………………………………………………53参考文献………………………………………………………………54综述………………………………………………………………………613攻读学位期间发表的学术论文目录……………………………………76致谢………………………………………………………………………774构树叶总黄酮对肝癌HepG-2细胞增殖和凋亡作用的研究中文摘要研究内容和目的1采用微波辅助提取法从构树紧中提取构树叶总黄酮，经大孔树脂柱、聚酰胺柱进行分离纯化，

7、做初步鉴定。2体外观察构树叶总黄酮抑制肝癌细胞株HepG-2细胞生长的作用，明确量效关系，选择药物的半数抑制浓度为后期进行构树叶总黄酮抗肝癌机制研究做参考。3为开发利用构树叶资源提供科学的实验依据。研究方法1采用微波辅助提取法，提取构树叶总黄酮初品，将提取物进一步进行分离鉴定。2应用噻唑蓝（methylthiazolyltetrazolium，MTT）法测定不同浓度的构树叶总黄酮作用不同时间（24h、48h、72h）对人肝癌HepG-2细胞的生长抑制率。3在倒置显微镜下观察不同浓度的构树叶总黄酮作用人

8、肝癌HepG-2细胞后的形态学变化。4采用hoechest33342荧光染色观察不同浓度构树叶总黄酮作用于人肝癌HepG-2细胞48h后细胞凋亡形态变化。55通过免疫组织化学方法检测人肝癌HepG-2细胞经构树叶总黄酮诱导凋亡过程中的Bcl-2、Bax蛋白表达。6RT-PCR检测Bcl-2、Bax相关基因经构树叶总黄酮处理前后表达变化。研究结果1微波辅助提取法提取构树叶总黄酮，经过分离纯化后，测定提取得率为（139mg/100g）。2MTT结果显示，构树